小鼠精子特异性ADAM3基因靶向siRNA的筛选研究

摘要

为在细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性ADAM3基因的最适siRNA序列，构建ADAM3过表达载体，将其转染至GC-2细胞后，通过Western Blot检测ADAM3蛋白表达情况；同时基于ADAM3基因序列设计并合成3对siRNA序列，将ADAM3过表达载体与各siRNA共转染至GC-2细胞，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测siRNA干扰效率，筛选干扰效率最高的siRNA序列。结果显示，ADAM3过表达载体在GC-2细胞中成功表达，ADAM3蛋白表达显著升高；设计合成的3对siRNA均能有效干扰ADAM3基因的表达，与未干扰组相比差异具有统计学意义(P<0.05),其中ADAM3-siRNA-2干扰效率最高，约76.33%。实验成功实现了ADAM3基因在GC-2细胞中的异位表达，并在细胞水平筛选出干扰小鼠ADAM3基因的最适siRNA序列，为后续研究奠定了基础。

关键词

解聚素与金属蛋白酶3 / 基因表达 / siRNA / GC-2细胞 / 干扰效率