BACH1过表达对Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒(oHSV2)复制的抑制效应

摘要

为探究BTB-CNC同源体1(BACH1)过表达对重组Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒（oHSV2）复制的影响，以PiggyBac双启动子萤火虫荧光素酶绿色荧光蛋白载体（PBDP-FLUC-GFP）为骨架，构建BACH1重组过表达质粒，采用PEI-max转染试剂将其转染至人胚胎肾细胞（293T），经嘌呤霉素筛选获得稳定表达BACH1与GFP的单克隆细胞系（293T-BACH1-GFP）。通过流式细胞术检测GFP表达以验证细胞系纯度，通过实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）与蛋白质印迹法（Western Blot）验证BACH1的mRNA及蛋白表达水平，借助CCK-8实验比较oHSV2对BACH1过表达细胞与野生型293T细胞杀伤能力，采用半数细胞培养物感染剂量法（CCID50）检测oHSV2感染两类细胞后的病毒滴度。结果显示，流式细胞术检测得293T-BACH1-GFP细胞中GFP阳性率为99.78%;RT-qPCR检测到293T-BACH1-GFP细胞中BACH1 mRNA较对照组显著升高；Western Blot可检测到293T-BACH1-GFP细胞中BACH1-6xHis融合蛋白的特异性条带；CCK-8实验表明，BACH1过表达细胞对oHSV2的杀伤敏感性显著降低；CCID50检测发现BACH1过表达后，细胞内oHSV2病毒滴度呈显著下降趋势。BACH1基因过表达可抑制oHSV2的复制，为后续溶瘤病毒治疗相关机制研究与方案优化提供实验依据。

关键词

BACH1 / Ⅱ型溶瘤单纯疱疹病毒 / 人胚胎肾细胞 / 复制抑制