STING基因敲除HCT116细胞系构建及其对oHSV2复制的影响

摘要

为探究STING基因对溶瘤Ⅱ型单纯疱疹病毒（oHSV2）在结肠癌细胞中复制的调控作用,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,针对人STING基因外显子设计2条特异性sgRNA,构建至pX459载体并共转染结肠癌HCT116细胞,经嘌呤霉素筛选与有限稀释法获得单克隆细胞株。通过Sanger测序及Western-blot验证,成功构建HCT116^STING-/-敲除细胞系。CCK-8法检测结果显示,STING敲除不影响HCT116细胞的基础活力。以oHSV2分别感染野生型与STING敲除细胞,采用CCK-8法、RT-qPCR（实时荧光定量PCR）及CCID₅₀（半数细胞感染剂量）检测病毒的溶瘤效果和复制水平。结果表明:STING敲除可显著提高细胞内oHSV2基因拷贝数与病毒滴度,增强HCT116细胞对溶瘤病毒的敏感性。本研究成功构建STING基因敲除的HCT116细胞系,证实STING可抑制oHSV2在结肠癌细胞中的复制,为筛选溶瘤病毒宿主限制因子及优化溶瘤病毒治疗策略提供实验依据。

关键词

STING / CRISPR/Cas9 / HCT116细胞 / oHSV2 / 病毒复制