采用KASP技术进行RhD阳性患者RHCE基因分型的临床应用研究

摘要

目的 建立基于竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应(KASP)的RHCE基因分型方法并评估其用于临床检测的准确性。方法 设计基于KASP技术的RHCE基因分型引物，对成都地区1 194例RhD阳性住院患者进行基于RHCE基因第2内含子109 bp插入缺失、c.307T>C及c.676C>G位点的RHCE基因分型，同时采用试管法对RHCE血型进行血清学检测。将两种方法检测结果进行比对，10例不一致标本分别复核血清学、KASP结果并测序验证。另从中选取377例增加c.48C>G位点检测，比较不同位点及联合检测RhC抗原的准确性。结果 在1 194例RhD阳性住院患者中，c.676位点检测RhE/Rhe和c.307位点检测Rhc与血清学结果的一致率均为100.0%，以109 bp插入判断RhC的准确率为99.7%,3例不符标本经复核血清学及Sanger测序证明第2内含子因109 bp缺失而导致基因分型假阴性。以c.48C等位基因检测RhC存在7例假阳性，准确率为98.1%(370/377);以109 bp插入与c.48C等位基因联合判定RhC抗原，排除两位点结果不一致的10例后，367例标本准确率达100%。1 194例患者的RhCE表型以CCee(45.8%)和CcEe(31.7%)为主，e抗原阳性率最高为92.2%,Ce单体型频率最高为66.9%。结论基于KASP技术的RHCE基因分型方法具有高准确性，109 bp插入缺失与c.48C等位基因联合检测可进一步提升检测RhC抗原的准确性。该方法应用于成都地区1 194例RhD阳性住院患者的RhCE基因分型，获得了本地区RhCE表型及单体型分布数据，为制定本地区RhCE抗原匹配输血策略提供了参考。

关键词

RHCE / 基因分型 / 竞争性等位基因特异性聚合酶链式反应 / 血型抗原

基金资助

成都市科技局重点研发支撑计划成果转化示范项目(2024-YF09-00052-SN); 中国医学科学院医学与健康科技创新工程(2021-I2M-1-060)