党参黄芯病菌的鉴定及绿色荧光蛋白基因转化

摘要

党参黄芯病降低党参的产量和质量，在明确该病病原菌分类地位的基础上，构建增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein, EGFP）标记的党参黄芯病菌转化株，为研究病原菌在党参植株体内的侵染特性提供可视化跟踪手段。基于形态学和多基因位点联合的方法，明确病原菌的分类地位。采用根癌农杆菌介导法（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, ATMT），将带有潮霉素磷酸转移酶基因（hygromycin phosphotransferase, HygB）和增强型绿色荧光蛋白基因EGFP的双元载体转入党参黄芯病菌分生孢子中并筛选出遗传稳定的转化子。结果表明，党参黄芯病常年田间发病率为20%～30%。病原菌为弯镰孢菌党参变种，遗传转化共获得138株阳性转化子，转化效率约为46个转化子·10^-6个孢子。随机挑选的4株阳性转化子经6次继代培养，具有稳定的潮霉素B抗性和绿色荧光表达，其中转化子EGFP7-3与EGFP7-4生物学特性及致病性和野生型党参黄芯病菌无显著差异，表明绿色荧光蛋白基因已成功转入党参黄芯病菌中，转化子EGFP7-3与EGFP7-4稳定遗传且致病力不受影响。本研究为党参黄芯病菌致病机理的研究提供了良好的材料和技术支撑。

关键词

党参 / 黄芯病 / 病原鉴定 / EGFP / ATMT / 基因转化