miR-139-3p靶向SPP1对肺癌A549细胞顺铂耐药的影响及其作用机制

摘要

目的:探究微小RNA-139-3p（miR-139-3p）靶向分泌型磷蛋白1（SPP1）对肺癌A549细胞顺铂（DDP）耐药的影响及其作用机制。方法:选取肺癌A549细胞构建DDP耐药细胞模型并进行耐药性鉴定，随后将具有耐药性的A549/DDP细胞分为空白对照组、阴性对照组、miR-139-3p过表达组、SPP1过表达组及SPP1敲低组。RT-qPCR检测细胞中的miR-139-3p和SPP1表达量；Western blot检测SPP1、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、蛋白激酶B（AKT）等蛋白表达水平；CCK-8法检测细胞增殖率及DDP耐药性；双荧光素酶报告基因实验验证miR-139-3p与SPP1的靶基因结合。结果:A549/DDP细胞的IC₅₀值高于A549细胞（P<0.05）,耐药指数（IR）值为3.877。RT-qPCR结果显示，与阴性对照组相比，miR-139-3p过表达组miR-139-3p的表达量升高（P<0.05）;与miR-139-3p过表达组相比，SPP1过表达组中SPP1表达量升高，SPP1敲低组中SPP1的表达量降低（P<0.05）;与miR-139-3p对照序列处理组相比，SPP1过表达质粒转染组的SPP1蛋白水平呈现上调（P<0.05）;而SPP1敲低组的蛋白表达较miR-139-3p过表达组出现下降（P<0.05）。CCK-8法检测结果显示，与阴性对照组相比，miR-139-3p过表达组细胞的增殖抑制率升高（P<0.05）,IC₅₀值降低（P<0.05）;与miR-139-3p过表达组相比，SPP1过表达组细胞的增殖抑制率降低（P<0.05）,IC₅₀值升高（P<0.05）。与miR-139-3p空白对照比较，野生型SPP1 3′UTR荧光素酶报告质粒与miR-139-3p模拟物结合的荧光素酶活性下降（P<0.05）,突变型SPP1 3′UTR荧光素酶报告质粒与miR-139-3p模拟物结合的荧光素酶活性无统计学差异（P>0.05）;与阴性对照组比较，miR-139-3p过表达组p-AKT的蛋白表达水平降低（P<0.05）;与miR-139-3p过表达组和SPP1敲低组比较，SPP1过表达组中p-AKT的蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论:肺癌A549细胞过表达miR-139-3p或敲低SPP1可抑制A549/DDP细胞的增殖，增强其对DDP的敏感性，机制可能与AKT信号通路相关。

关键词

微小RNA-139-3p / 分泌型磷蛋白1 / 肺癌 / 耐药性 / 细胞增殖