乙脑/寨卡嵌合病毒包膜蛋白K283R突变对小鼠神经毒力的影响

摘要

目的:探讨乙脑/寨卡嵌合毒株JE/ZIKV(MR766)包膜蛋白K283R突变对小鼠神经毒力的影响。方法:基于JE/ZIKV(MR766)嵌合病毒全长cDNA,通过重叠延伸PCR介导的定点突变及分子克隆技术，构建含包膜蛋白E第283位突变(K283R)的感染性全长克隆。经酶切鉴定后，通过XhoⅠ酶线性化全长感染性克隆并体外转录获得突变病毒RNA,经电穿孔转染BHK21细胞拯救出突变病毒JE/ZIKV(MR766)(K283R)。通过病毒传代和测序、蚀斑实验、生长曲线、间接免疫荧光鉴定病毒特性，利用3周龄雌性昆明鼠脑内攻毒模型，解析嵌合病毒的神经毒力，以LD50量化神经毒力水平。结果:酶切验证确认成功构建JE/ZIKV(MR766)(K283R)全长感染性克隆。蚀斑实验、病毒测序及间接免疫荧光证实拯救目的病毒成功，其蚀斑直径大于亲本株JE/ZIKV(MR766)[(0.20±0.04 vs.0.14±0.03)cm,P<0.05]。生长曲线显示，突变株与亲本株均在感染后60 h达到病毒滴度峰值。动物实验表明，JE/ZIKV(MR766)(K283R)的LD50为1.35 pfu/0.03 mL,稍低于亲本株(2.21 pfu/0.03 mL)。结论:寨卡病毒E蛋白K283R突变未明显减弱嵌合病毒对小鼠的脑内神经毒力，提示该位点并非调控病毒毒力的关键位点。

关键词

寨卡病毒 / 乙脑病毒 / 嵌合病毒 / 包膜蛋白 / 神经毒力