长链非编码RNA AK146527通过靶向miR-15/16调控骨形成的分子机制

摘要

目的:检测AK146527对成骨分化和骨形成的调控作用；研究AK146527靶向miR-15/16促进骨形成的分子机制，并探究AK146527功能区的原位促成骨作用。方法:利用RT-PCR检测小鼠股骨组织中AK146527表达水平和骨形成标志因子的相关性；在MC3T3-E1前成骨细胞中转染AK146527的过表达质粒和siRNA检测AK146527对成骨细胞分化的作用；对转染AK146527后MC3T3-E1前成骨细胞中的成骨分化关键转录因子的活性进行了初步筛选，检测AK146527对成骨分化调控的具体信号通路；用AK146527的过表达质粒或siRNA转染MC3T3-E1细胞，并检测转染后细胞中miR-15/16家族的水平，研究其对miR-15/16家族的靶向调控作用；在MC3T3-E1细胞和C57BL/6小鼠中转染了AK146527不同区域过表达质粒，并检测转染后细胞成骨分化水平和小鼠骨形成水平，证明AK146527与miR-15/16的结合序列可以调控成骨细胞分化和骨形成；构建了去卵巢OP小鼠模型，并在小鼠颅骨皮下局部转染了AK146527结合区过表达质粒，研究AK146527结合区对OP的治疗效果；最后，通过类器官技术证明了AK146527结合区的原位促成骨效果。结果:(1)AK146527表达水平与骨形成相关；(2)AK146527可促进骨形成；(3)AK146527对成骨分化的调控可能是基于wnt信号通路；(4)AK146527可通过其结合区域结合miR-15/16家族，从而起到抑制作用，具有专一性；(5)AK146527通过miR-15/16结合位点调控成骨分化；(6)AK146527结合区具有原位促成骨作用，在骨缺损修复中表现出良好的应用潜力。结论:AK146527与骨形成高度相关，并可通过靶向miR-15/16促进成骨分化和骨形成。其与miR-15/16结合区可以对去卵巢骨质疏松小鼠的骨形成有恢复效果。此外AK146527功能区在颅骨缺损小鼠植入类器官后具有原位促成骨和原位骨修复的效果。本研究对骨形成的机制研究提供了新的理论和实验基础，并为提高骨形成相关LncRNA的调控效率提供了新策略。

关键词

长链非编码RNA / 成骨细胞分化 / miRNA / 骨形成

基金资助

国家自然科学基金(82101640); 四川省自然科学基金项目(23NSFSC6012); 四川省卫健委项目(21PJ101)