弗氏柠檬酸杆菌可视化LAMP检测方法的建立

摘要

为了建立一种快速鉴别诊断弗氏柠檬酸杆菌（Citrobacter freundii）的环介导恒温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）检测方法，根据OmpA基因保守序列设计1套LAMP特异性检测引物，以弗氏柠檬酸杆菌DNA为模板、羟基萘酚蓝为显色剂，建立弗氏柠檬酸杆菌可视化LAMP检测方法，并优化反应体系和反应条件，检测该方法的特异性及灵敏度。结果显示：所建立的弗氏柠檬酸杆菌可视化LAMP检测方法与大肠杆菌（Escherichia coli）、鲁氏不动杆菌（Acinetobacter lwoffi）、鲁氏耶尔森氏菌（Yersinia ruckeri）、蜂房哈夫尼亚菌（Hafnia alvei）、迟缓爱德华氏菌（Edwardsiella tarda）、温和气单胞菌（Aeromonas sobria）、杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）、维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）和嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）均无交叉反应，最低检测量为1.43×10～2copies。为了进一步缩短检测该菌的过程，将HNB染料添加到LAMP反应体系中建立可视化弗氏柠檬酸杆菌LAMP检测方法，55 min内在可见光下通过肉眼直接观察颜色变化来判断结果。本研究建立的弗氏柠檬酸杆菌可视化LAMP检测方法操作简便、快速、特异性及灵敏性高，对弗氏柠檬酸杆菌引起的水产动物疾病的快速诊断具有重要的实践意义。

关键词

弗氏柠檬酸杆菌 / 环介导恒温扩增技术 / 快速检测

基金资助

国家自然科学基金青年项目（32002420）; 江苏高校动物重要疫病和重要人兽共患病防控技术国际合作联合实验室资助[5]; 中国博士后科学基金（2021M702761）; 扬州大学“青蓝工程”（2019）; 2022年市级农科院联盟区域示范性项目（2022SJLM08）; 湖州市公益性应用研究项目（2021GZ31）