BLV-miRNAs对牛乳过氧化物酶的影响

摘要

为探究牛白血病病毒(bovine leukemia virus, BLV)编码的miRNAs(BLV-miRNAs)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)乳过氧化物酶(LPO)的影响。首先通过ELISA测定高低不同载量BLV阳性奶牛牛乳中LPO的含量；随后体外培养BMECs,分别感染(1 MOI)BLV全长和缺失miRNAs的BLV(BLV-△miRNAs),通过荧光定量PCR、ELISA等方法检测各组BMECs LPO的表达水平；再通过StarMir等软件程序预测10种BLV-miRNAs是否靶向LPO;根据靶基因预测结果，进行BLV-miRNAs转染和靶基因初步验证。结果显示：BLV高载量阳性奶牛和低载量阳性奶牛牛乳中的LPO含量比阴性奶牛牛乳中的LPO分别降低了8.73%和9.68%;体外试验结果显示：与感染BLV全长病毒组相比，缺失BLV-miRNAs后BMECs中的LPO表达水平显著升高(P<0.05);靶位点预测结果显示BLV-miR-B1-5p、B3-3p和B4-5p可共同靶向LPO基因；转染BLV-miR-B1-5p到BMECs后LPO的基因表达显著下调(P<0.05),并随着转染剂量的增多，LPO的表达水平呈下降趋势；转染BLV-miR-B4-3p到BMECs后LPO的基因表达显著下调(P<0.05),但没有剂量依赖性。综上所述，BLV-miRNAs可以抑制BMECs中LPO的表达。

关键词

牛白血病病毒 / 乳过氧化物酶 / BLV-miRNAs / 奶牛乳腺上皮细胞