lncRNA FOXP4-AS1通过miR-507调控甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的作用机制研究

摘要

背景与目的：长链非编码RNA (lncRNA)可通过结合mircoRNA (miRNA)来间接调控下游mRNA的转录及降解，从而调控肿瘤发生与发展。lncRNA FOXP4-AS1是近年来发现的一种新的肿瘤相关生物标志物，在不同的肿瘤中发挥着不同的调控作用，笔者前期研究发现，FOXP4-AS1在甲状腺乳头状癌（PTC）中呈低表达，发挥抑癌作用。此外，笔者通过数据库预测miR-507可与FOXP4-AS1互补结合。因此，本研究探讨FOXP4-AS1通过调控miR-507及其下游靶mRNA抑制PTC细胞的生长的作用与机制。方法：通过TCGA数据库分析miR-507在甲状腺癌（TC）中的表达水平及其在TC中的临床意义。qRT-PCR检测PTC细胞系（TPC-1、K1）和正常甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1）中miR-507的表达水平，以及过表达及敲低FOXP4-AS1后检测miR-507表达水平的变化。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXP4-AS1与miR-507靶向关系。分别在FOXP4-AS1过表达及敲低稳转株上转染miR-507的模拟物、抑制物，并分别用CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验、划痕愈合实验以及流式细胞术检测细胞功能的变化。用生物信息学方法分析mi R-507下游靶点并用qRT-PCR验证。结果：TCGA数据库分析结果显示，miR-507在TC中高表达，且其表达水平TC患者与临床病理分期、T分期、腺外浸润等临床病理特征有关（均P<0.05）。qRT-PCR结果显示，与Nthy-ori3-1细胞比较，miR-507在两种PTC细胞中呈高表达，且过表达和敲低FOXP4-AS1后，两种PTC细胞中miR-507的表达水平随之反向改变（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，FOXP4-AS1与miR-507靶向结合，并抑制miR-507的表达。细胞功能实验及功能回复实验显示，FOXP4-AS1过表达后，PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显减弱，同时加入miR-507的模拟物后，PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）；敲低FOXP4-AS1后，PTC细胞的增殖活力、迁移能力和抗凋亡能力明显升高，同时加入miR-507的抑制物后，PTC细胞以上功能回复（均P<0.05）。数据库预测与GO、KEGG富集分析结果显示，miR-507下游可能涉及CAMK4,qRT-PCR验证结果显示，CAMK4的表达水平随FOXP4-AS1表达水平的上调、下调呈同向改变，且其表达水平随miR-507模拟物和抑制物的加入而反向改变（均P<0.05）。结论：FOXP4-AS1可以靶向结合miR-507，并可能通过海绵作用抑制miR-507表达水平调控PTC细胞的增殖、迁移及细胞凋亡。CAMK4可能是FOXP4-AS1/miR-507通路发挥抑癌作用的下游靶点之一。

关键词

甲状腺肿瘤 / RNA,长链非编码 / 微RNAs / 细胞增殖 / 细胞凋亡