肝细胞癌中PD-L1表达与STAT3/PRKDC/MYC信号通路的关系研究

摘要

背景与目的：目前，肝细胞癌（HCC）的治疗仍面临复发和转移的严峻挑战，而肿瘤免疫逃逸是导致这些问题的关键机制之一。信号转导与转录激活因子3 (STAT3)作为重要的转录因子，在多种恶性肿瘤中呈现过度激活状态，不仅参与肿瘤的发生与进展，还与肿瘤免疫逃逸密切相关。程序性死亡配体1 (PD-L1)是关键的免疫检查点，其表达上调能够帮助肿瘤细胞逃避免疫监视，从而抑制抗肿瘤免疫。研究显示，STAT3可能通过与蛋白激酶DNA激活催化多肽（PRKDC）的相互作用激活骨髓细胞瘤病毒癌基因（MYC）信号通路，进而促进PD-L1的表达并诱导免疫逃逸。然而，STAT3/PRKDC/MYC轴在HCC中的具体作用机制尚不明确。本研究旨在揭示STAT3通过PRKDC/MYC信号通路调控PD-L1表达并可能诱导HCC免疫逃逸的分子机制，以期为HCC免疫治疗提供潜在靶点。方法：用qRT-PCR和Western blot检测人正常肝细胞（HL-7702）与人HCC细胞（HuH-7、HepG2）中STAT3的表达。构建敲低STAT3 (si-STAT3)和过表达PRKDC (oe-PRKDC)质粒，以及各自的阴性对照（si-NC、oe-NC）质粒，按实验设计分别转染至HCC细胞（HuH-7）中，以无处理的HuH-7细胞为空白对照。采用Western blot分析各组细胞STAT3、PRKDC、PD-L1和MYC通路相关蛋白的表达。采用CCK-8、Transwell、划痕试验和流式细胞术评估HCC细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡。将HuH-7细胞与人外周血单个核细胞（hPBMC）共培养后，采用ELISA法检测免疫调节因子干扰素γ (IFN-γ)的含量。采用免疫共沉淀和免疫荧光共定位验证STAT3与PRKDC蛋白之间的相互作用。结果：qRT-PCR和Western blot结果显示，HCC细胞中STAT3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高（均P<0.05）。功能实验结果显示，si-STAT3组HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显减弱，细胞凋亡明显升高；PD-L1和MYC通路相关蛋白的表达水平明显下调；与h PBMC共培养后IFN-γ的分泌水平明显升高（均P<0.05）。与oe-PRKDC质粒共培养后，STAT3敲低对HCC细胞的以上影响均被明显逆转（均P<0.05）。Scansite 4.0数据库分析结果显示，STAT3与PRKDC存在结合位点，免疫共沉淀与免疫荧光共定位实验表明STAT3与PRKDC蛋白的相互作用。结论：STAT3在HCC细胞中高表达，并可通过与PRKDC相互作用促进HCC细胞增殖、迁移和侵袭以及免疫逃逸，抑制细胞凋亡，并激活MYC通路，增加PD-L1表达，STAT3/PRKDC/MYC轴可能是HCC免疫治疗的潜在靶点。

关键词

癌,肝细胞 / 肿瘤免疫逃逸 / STAT3转录因子