SOX2-OT/miR-409-3p/ANXA2轴对胃癌细胞功能的调控及其作用机制

摘要

背景与目的：长链非编码SOX2-OT (SRY-盒转录因子2重叠转录本)可参与调控癌细胞周期、细胞增殖等过程。此外，生物信息学分析发现miR-409-3p与SOX2-OT和膜联蛋白A2 (ANXA2)存在结合位点。因此，本研究探讨SOX2-OT/miR-409-3p/ANXA2轴在胃癌细胞中的表达及作用。方法：用q RT-PCR检测胃癌组织与胃癌细胞中SOX2-OT、miR-409-3p和ANXA2 mRNA的表达。将胃癌细胞分别转染SOX2-OTshRNA质粒（sh-SOX2-OT）、共转染sh-SOX2-OT和miR-409-3p抑制物、共转染sh-SOX2-OT和ANXA2过表达质粒，并设空白对照、shRNA阴性质粒对照、抑制物阴性质粒对照和过表达质粒阴性对照，随后检测各组细胞SOX2-OT、miR-409-3p和ANXA2 mRNA表达，细胞增殖与细胞迁移/侵袭能力，细胞凋亡情况，以及增殖标志物Ki-67、活化的半胱天冬酶-3 (cleaved caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、ANXA2蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-409-3p、SOX2-OT、ANXA2之间的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测SOX2-OT对胃癌肿瘤生长的影响。结果：胃癌组织（vs.癌旁组织）与胃癌细胞（vs.正常胃上皮细胞）中SOX2-OT和ANXA2表达明显升高，miR-409-3p表达明显降低（均P<0.05）。转染sh-SOX2-OT后，胃癌细胞中SOX2-OT和ANXA2 mRNA表达明显降低，miR-409-3p表达明显升高（均P<0.05）；增殖与迁移/侵袭能力明显减弱，凋亡率明显升高（均P<0.05）;ANXA2、Ki-67、MMP-9蛋白表达明显降低，cleaved caspase-3和Bax蛋白表达明显升高（均P<0.05）。同时转染miR-409-3p抑制物或过表达ANXA2后，sh-SOX2-OT对胃癌细胞的上述影响均被明显抑制（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验显示，miR-409-3p、SOX2-OT、ANXA2之间的靶向关系。移植瘤实验结果显示，转染si-SOX2-OT的胃癌细胞在裸鼠体内的生长被明显抑制，且移植瘤组织中SOX2-OT表达下调、miR-409-3p表达上调，ANXA2和Ki-67蛋白阳性率明显降低（均P<0.05）。结论：SOX2-OT在胃癌细胞中表达上调，SOX2-OT可能通过竞争性结合miR-409-3p解除其对ANXA2的抑制作用，进而促进胃癌细胞的恶性生物学行为。因此，SOX2-OT/miR-409-3p/ANXA2轴可能是胃癌治疗的潜在分子靶点。

关键词

胃肿瘤 / RNA,长链非编码 / 微RNAs / 膜联蛋白A2 / 细胞增殖 / 肿瘤浸润