CLSTN3在结直肠癌中的促癌作用及其与淀粉样前体蛋白的相互作用研究

摘要

背景与目的：CLSTN3是近年来新发现的结直肠癌（CRC）候选生物标志物，但其在CRC中的表达特征、临床意义及作用机制尚不明确。本研究探讨CLSTN3在CRC中的表达、预后价值及其与淀粉样前体蛋白（APP）的相互作用关系。方法：收集313例CRC石蜡组织及17例新鲜组织标本，采用免疫组织化学及Western blot检测CLSTN3和APP表达，并分析其与临床病理特征及预后的关系。构建CLSTN3过表达HCT8细胞和CLSTN3敲减HCT116细胞模型，通过CCK-8实验及裸鼠皮下成瘤实验评估CLSTN3对CRC细胞增殖能力的影响。利用GeneMANIA数据库预测CLSTN3相关互作分子，并采用免疫共沉淀验证CLSTN3与APP的相互作用。结果：CLSTN3在CRC组织及细胞系中的表达均明显高于正常组织及正常结肠细胞（均P<0.05）。免疫组化结果显示，CLSTN3在CRC组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织（68.7%vs. 27.2%）。CLSTN3高表达与TNM分期、肿瘤坏死及神经脉管侵犯密切相关（均P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，CLSTN3高表达患者的总体生存（OS）及无病生存（DFS）均明显降低（均P<0.001）。多因素Cox分析表明，CLSTN3高表达是CRC患者OS及DFS的独立危险因素。体外及体内实验结果显示，CLSTN3过表达可显著促进CRC细胞增殖及移植瘤生长，而CLSTN3敲减则明显抑制肿瘤生长。生物信息学分析提示APP可能是CLSTN3的重要互作分子。免疫共沉淀证实CLSTN3与APP在CRC细胞中存在直接相互作用。Western blot结果显示，CRC组织中CLSTN3与APP表达呈正相关（r=0.604,P=0.012），且二者在伴肿瘤坏死组织中的表达水平更高。结论：CLSTN3在CRC中异常高表达，并通过促进肿瘤细胞生长参与CRC进展。CLSTN3高表达提示不良预后，其可能通过与APP相互作用发挥促癌效应。CLSTN3有望成为CRC新的预后标志物及潜在治疗靶点。

关键词

结直肠肿瘤 / CLSTN3 / 淀粉样前体蛋白 / 预后

基金资助

国家自然科学基金资助项目（81372630）; 湖南省自然科学基金资助项目（2023JJ40977,2022JJ30776）