基于Rorα/Bmal1信号轴探讨半夏秫米汤对慢性失眠大鼠睡眠稳态的影响

摘要

目的 探讨“引阳入阴”代表性方剂半夏秫米汤对慢性失眠（CI）大鼠生物钟基因Rorα/Bmal1信号轴的影响。方法 SPF级大鼠36只，随机分为空白组、模型组、半夏秫米汤低剂量组（BXSM-L组）、半夏秫米汤中剂量组（BXSM-M组）、半夏秫米汤高剂量组（BXSM-H组）、地西泮组（DZ组），每组6只。除空白组外，其余各组均采用小平台水环境法复制CI模型大鼠。BXSM-L组、BXSM-M组、BXSM-H组大鼠分别灌胃4.69、9.38、18.75 g/kg半夏秫米汤水煎剂，DZ组大鼠灌胃0.52 mg/kg地西泮水溶液，空白组和模型组大鼠均给予等体积生理盐水灌胃，连续14 d。给药结束后，用16道生理记录仪监测脑电波，实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting、免疫组织化学法分别检测视交叉上核（SCN）、大脑皮层（CC）的Rorα和Bmal1基因及蛋白表达，酶联免疫吸附试验检测脑干与血清中γ氨基丁酸（GABA）、谷氨酸（Glu）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）含量。结果 模型复制成功后的大鼠皮毛暗淡无光泽，精神萎靡，易激惹，对周围声、光刺激敏感，昼夜节律消失。空白组α波、β波频率均低于造模组（除空白组外其余各组统称为造模组）、δ波频率高于造模组（P <0.05）。空白组β波波幅低于造模组，δ波波幅高于造模组（P <0.05）。模型组的α波、δ波频率较空白组均下降（P <0.05）,β波频率较空白组上升（P <0.05），半夏秫米汤不同剂量组及DZ组α波频率较模型组均上升（P <0.05）,β波频率较模型组均下降（P <0.05）,BXSM-M组、BXSM-H组及DZ组δ波频率较模型组均上升（P <0.05）。模型组的β波波幅较空白组上升（P <0.05）,δ波波幅较空白组下降（P <0.05），半夏秫米汤不同剂量组及DZ组β波波幅较模型组均下降（P <0.05）,δ波幅较模型组均上升（P <0.05）,BXSM-L组α波波幅较模型组上升（P <0.05）。模型组血清、脑干Glu、GABA含量较空白组均升高（P <0.05），半夏秫米汤不同剂量组及DZ组血清Glu含量较模型组均降低（P <0.05）,BXSM-M组、BXSM-H组及DZ组脑干Glu含量较模型组均降低（P <0.05），半夏秫米汤不同剂量组及DZ组血清GABA较模型组均降低（P <0.05）,BXSM-L组、BXSM-H组及DZ组脑干GABA含量较模型组均降低（P <0.05）。模型组血清、脑干NE、DA含量较空白组均升高（P <0.05），半夏秫米汤不同剂量组及DZ组血清、脑干NE含量较模型组均降低（P <0.05）,BXSM-M组、BXSM-H组及DZ组血清DA含量较模型组均降低（P <0.05）,BXSM-H组和DZ组脑干DA较模型组降低（P <0.05）。模型组SCN、CC的Rorα与Bmal1基因和蛋白相对表达量较空白组下降（P <0.05）,BXSM-M组、BXSM-H组及DZ组SCN、CC的Rorα与Bmal1基因和蛋白相对表达量较模型组均上升（P <0.05）。结论 首次从生物钟基因角度揭示了半夏秫米汤“引阳入阴”改善CI的机制，可能是通过上调Rorα/Bmal1信号轴调控睡眠稳态。

关键词

慢性失眠 / 半夏秫米汤 / 生物钟基因 / 睡眠稳态 / 脑电波