乙型肝炎病毒通过自分泌运动因子/溶血磷脂酸信号损伤对糖稳态的作用及其机制研究

摘要

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）通过自分泌运动因子（ATX）/溶血磷脂酸（LPA）信号对糖稳态的损伤作用及相关机制。方法 利用基因芯片数据库分析HBV对ATX表达的影响。Western blotting检测HBV细胞株HepG2215、稳定表达HBV反式调节蛋白HBx和PreS2的HBx-HepG2和PreS2-HepG2细胞、对照组HepG2细胞的ATX蛋白表达水平。双萤光素酶报告基因检测HBx和PreS2对ATX启动子作用。构建稳定表达HBx和Pre-S2的小鼠分泌胰岛素细胞HBx-NIT、PreS2-NIT，检测两者对胰岛素分泌的影响。利用rAAV8-1.3HBV经尾静脉注射C57BL/6小鼠复制HBV小鼠模型，NC为注射同体积生理盐水的C57BL/6小鼠。小鼠按2 g/kg腹腔注射葡萄糖进行糖耐量试验（GTT）。采用液相色谱-质谱联用法、酶联免疫吸附试验和血糖分析仪分别检测小鼠血清LPA、血清胰岛素和血糖浓度。结果 HepG2215细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2(P <0.05)。PreS2与ATX启动子共转染组萤光素酶活性高于ATX启动子转染组（P <0.05）,HBX与ATX启动子共转染组的萤光素酶活性高于ATX启动子转染组（P <0.05）。HBx-HepG2细胞ATX蛋白相对表达量高于HepG2细胞（P <0.05）,PreS2-HepG2细胞高于HepG2细胞（P <0.05）。添加不同浓度LPA后NIT细胞胰岛素分泌表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05）。1～3μmol/L LPA相对表达量与胰岛素分泌呈负相关（r=-0.990,P <0.05）。HBx-NIT细胞添加Ki16425前的胰岛素水平低于NIT细胞（P <0.05）,PreS2-NIT细胞低于NIT细胞（P <0.05）。NIT、HBx-NIT和PreS2-NIT细胞添加Ki16425后的胰岛素水平较添加前高（P <0.05）。实验组血清LPA相对表达量、平均空腹血糖浓度、注射葡萄糖后的60、120 min平均血糖浓度和血糖浓度曲线下面积（AUC）平均值较对照组高（P <0.05）。实验组注射葡萄糖后15 min血清胰岛素浓度、血清胰岛素水平的AUC值较对照组低（P <0.05）。用HBV小鼠GTT血糖AUC绘制的ROC曲线显示，曲线面积为0.770(95%CI:0.556,0.984)，特异性为60.00%(95%CI:0.122,0.738)，敏感性为90.00%(95%CI:0.555,0.998)。用HBV小鼠空腹血糖浓度绘制的ROC曲线显示，曲线面积为0.865(95%CI:0.703,1.027)，特异性为80.00%(95%CI:0.444,0.975)，敏感性为60.00%(95%CI:0.262,0.878)。实验组胰岛β细胞功能指数、胰岛素敏感指数均小于对照组，胰岛素抵抗指数大于对照组（P <0.05）。结论 HBV反式调节蛋白HBx和Pre-S2上调ATX的表达，增强ATX/LPA信号，导致胰岛素分泌抑制，糖耐量异常，糖稳态受损。

关键词

乙型肝炎病毒 / 反式调节蛋白 / 自分泌运动因子/溶血磷脂酸信号 / 糖稳态