MicroRNA-195/497对香烟烟雾提取物诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达的影响

摘要

目的 探讨microRNA-195/497 (miR-195/497)在香烟烟雾提取物（CSE）诱导的人支气管上皮细胞中影响转化生长因子-β (TGF-β)表达的作用机制。方法 用3%CSE诱导BEAS-2B细胞模拟慢性阻塞性肺疾病（COPD）的发病机制，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-195、miR-497、SMAD7及TGF-β基因表达。双荧光素酶报告实验验证miR-195、miR-497与SMAD7的靶向关系，将miR-195mimic和miR-497 mimic转染至3%CSE处理的细胞中，qRT-PCR检测SMAD7的表达。将miR-195 mimic、miR-497 mimic和si-SMAD7转染至3%CSE处理的细胞中，qRT-PCR检测miR-195、miR-497、SMAD7、TGF-β的基因表达，Western blotting检测SMAD7、TGF-β的蛋白表达。结果 3%CSE组miR-195、miR-497 mRNA相对表达量低于正常细胞组（P <0.05）,SMAD7、TGF-β mRNA相对表达量高于正常细胞组（P <0.05）。miR-195 mimic组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组（P <0.05）。miR-195 mimic组与mimic NC组Wt-SMAD7 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。miR-497 mimic组WtSMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组（P <0.05）。miR-497 mimic组与mimic NC组Mut-SMAD7mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。miR-195 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组（P <0.05）。miR-497 mimic组SMAD7 mRNA相对表达量低于mimic NC组（P <0.05）。3%CSE组细胞miR-195和miR-497相对表达量较Control组下降（P <0.05）,SMAD7及TGF-β蛋白相对表达量升高（P <0.05）;miR-195 mimic+3%CSE组细胞miR-195相对表达量较3%CSE组升高（P <0.05）,SMAD7、TGF-β下降（P <0.05），而miR-497相对表达量无明显差异（P>0.05）;miR-497 mimic+3%CSE组细胞miR-497相对表达量较3%CSE组升高（P <0.05）,SMAD7、TGF-β下降（P <0.05），而miR-195相对表达量无明显差异（P>0.05）;si-SMAD7+3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较3%CSE组下降（P <0.05），而miR-195、miR-497无明显差异（P>0.05）。3%CSE组SMAD7、TGF-β蛋白相对表达量较Control组升高（P <0.05）,miR-195 mimic+3%CSE组、miR-497 mimic+3%CSE组、si-SMAD7+3%CSE组较3%CSE组下降（P <0.05）。结论 miR-195/497可通过调控SMAD7的表达影响CSE诱导的人支气管上皮细胞中TGF-β表达。

关键词

慢性阻塞性肺病 / microRNA-195 / microRNA-497 / SMAD7 / 转化生长因子-β