钩吻总碱对肺腺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

摘要

目的 以人肺腺癌细胞（A549、SPCA1）为研究对象，通过在培养液中加入不同浓度的钩吻总碱（TAG）研究其抗肿瘤作用。方法 采用加热回流、萃取等方法提取TAG，利用薄层色谱法鉴定TAG的提取，通过Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合不同浓度的TAG作用A549、SPCA1细胞的细胞融合度并观察A549、SPCA1细胞的形态，采用CCK-8法、集落形成实验检测细胞增殖，Hoechst33258染色、Rhodamine123染色检测细胞凋亡，碘化丙啶单染法检测细胞周期，Western blotting检测凋亡指标蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果 经薄层色谱法鉴定成功提取TAG。Incucyte S3活细胞动态分析系统拟合出TAG作用A549、SPCA1细胞的EC50值分别是99.2、82.0μg/mL，由此确定TAG作用A549、SPCA1细胞的低、中、高浓度依次为50、100、150μg/mL，且细胞拍照观察到随着药物浓度增加细胞融合度下降、细胞数目减少。CCK-8法和集落形成实验结果表明TAG抑制A549、SPCA1细胞增殖（P <0.05）。Hoechst 33258细胞核染色实验发现给药组细胞出现核碎裂；流式细胞术检测Rhodamine123探针发现给药组出现荧光信号强度增加，检测细胞周期发现TAG使A549、SPCA1细胞周期阻滞在G₂/M期；Western blot结果显示TAG诱导Bcl-2蛋白表达下调，Bax表达上调、Caspase-3蛋白切割活化增加，通过细胞染色实验、流式细胞术及Western blotting表明TAG促进A549、SPCA1细胞凋亡（P <0.05）。结论 TAG抑制肺腺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡。

关键词

肺腺癌 / 钩吻总碱 / 细胞增殖 / 细胞凋亡 / 细胞周期

基金资助

广西自然科学基金项目（No:2018GXNSFDA050009）; 广西中医药大学博士启动基金项目（No:2020BS034）;广西中医药大学青年基金项目（No:2022QN026）; 广西研究生教育创新计划项目（No:YCSW2023388）; 广西国际壮医医院引进人才科研启动基金项目（No:GZ2021RC016）