SHP2过表达抑制人肝星状细胞LX-2凋亡

摘要

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法 将表达绿色荧光蛋白（GFP）的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2转染LX-2细胞。实验分为3组：(1)Control组，以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞；(2)Ad-GFP组，转染空病毒Ad-GFP；(3)Ad-SHP2组，转染重组腺病毒Ad-SHP2。Western blotting检测3组LX-2细胞的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组LX-2细胞的SHP2 mRNA表达；TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测3组LX-2细胞凋亡情况。结果 Ad-SHP2组LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA相对表达量高于Control组及Ad-GFP组（P <0.05）;Ad-GFP组与Control组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示，与Control组LX-2细胞凋亡率（3.08±0.73）%、（9.44±0.80）%及Ad-GFP组（3.25±0.85）%、（8.89±1.98）%比较，Ad-SHP2组（1.52±0.26）%、（2.44±0.93）%降低（P <0.05）;Ad-GFP组与Control组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。3组LX-2细胞的Bax及Bcl-2蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P <0.05）;Ad-SHP2组LX-2细胞的Bax蛋白相对表达量（1.55±0.21）低于Control组（1.99±0.15）及Ad-GFP组（2.00±0.16）(P <0.05)；而Bcl-2蛋白相对表达量（2.13±0.25）则高于Control组（1.71±0.15）及Ad-GFP组（1.52±0.14）(P <0.05)；但Ad-GFP组与Control组Bax及Bcl-2蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 SHP2过表达通过升高Bcl-2/Bax抑制体外人肝星状细胞LX-2凋亡。

关键词

肝纤维化 / 肝星状细胞 / SHP2 / 细胞凋亡