氧化苦参碱减轻糖尿病肾病小鼠肾组织炎症及纤维化反应的机制研究

摘要

目的 通过观察氧化苦参碱（OMT）对同源结构域相互作用蛋白激酶2 (HIPK2)、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、上皮钙黏素（E-cadherin）、纤维连接蛋白（Fibronectin）、白细胞介素-1β(IL-1β)和IL-18表达的影响，初步探讨OMT在糖尿病肾病（DKD）中抗炎抗纤维的可能保护机制。方法 健康6周龄的db/db小鼠适应性喂养2周，随机分为糖尿病组（DM组）和OMT组，每组10只。OMT组给予腹腔注射氧化苦参碱[120 mg/（kg·d）]，持续8周，并设同月龄同背景db/m小鼠为正常对照组（NC组）。处死小鼠前收集血液和尿液，检测各项生化指标，HE和Masson染色观察小鼠肾组织病理形态学改变，Western blotting检测、免疫组织化学染色观察各组小鼠肾皮质TLR4、HIPK2、NLRP3、Ecadherin、Fibronectin的表达水平及部位；酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清IL-1β、IL-18水平。采用Pearson法对HIPK2与TLR4、NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果 DM组体重、血糖、24 h尿蛋白量、总胆固醇、甘油三酯水平较NC组均升高（P <0.05）,OMT组24 h尿蛋白量、总胆固醇、甘油三酯水平较DM组降低（P <0.05）。病理染色显示，DM组可见肾小球系膜区节段性增生，基底膜无明显增厚，肾小管管腔明显扩张，肾小管上皮细胞空泡样变性，间质区炎症细胞浸润和蓝色胶原纤维沉积；经OMT治疗后，相较于DM组，OMT组肾小球系膜区增生程度减轻，肾小管病变有所改善，间质区炎症细胞浸润减少。DM组TLR4、HIPK2、NLRP3、Fibronectin蛋白相对表达量较NC组升高（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量较NC组降低（P <0.05）;OMT组小鼠TLR4、HIPK2、NLRP3、Fibronectin蛋白相对表达量较DM组降低（P <0.05）,E-cadherin蛋白相对表达量较DM组升高（P <0.05）。DM组血清中IL-1β、IL-18相对表达量较NC组升高（P <0.05）,OMT组较DM组降低（P <0.05）。Pearson相关相关性分析显示，DM组肾组织中HIPK2蛋白与TLR4、NLRP3蛋白表达均呈正相关（r=0.881和0.774，均P <0.05）。OMT组HIPK2蛋白与TLR4、NLRP3蛋白表达均呈正相关（r=0.814、0.871，均P <0.05）。结论 OMT抑制DM小鼠肾组织的炎症反应和纤维化程度，可能与抑制HIPK2及炎症信号通路的活化有关。

关键词

糖尿病肾病 / 氧化苦参碱 / Toll样受体4 / 同源结构域相互作用蛋白激酶2 / 含NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3