GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用

摘要

目的 探讨GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用。方法 选取新生3～7日龄的SD大鼠若干，提取原代脑微血管内皮细胞（BMEC）及星形胶质细胞（AC）。于体外构建BMEC单层培养模型和BMEC+AC共培养模型，分为BMEC单层培养模型组、BMEC+AC共培养组及Blank组（只加培养基）；取体外血脑屏障（BBB）共培养模型，分为Control组和脑出血组（ICH组），Control组加入完全培养基处理，ICH组加入40 u/mL凝血酶处理，分别处理12 h模拟体外ICH模型，并通过4 h渗漏试验、荧光素钠通透性试验评价BBB及ICH模型的通透性。另取BBB共培养模型大鼠分成5个组：Control组、ICH组，以及GW0742低、中、高剂量组（1.25、2.50、5.00μmol/L），给药24 h后采用Western blotting检测MMP-9、ZO-1、Occludin蛋白表达。结果4 h渗漏试验结果显示：与Blank组比较，BMEC单层培养组能维持一定的液面差；与BMEC单层培养组比较，BMEC+AC共培养组能维持较好的液面差。荧光素钠通透性试验结果显示各组通透性为：Blank组> BMEC单层培养组> BMEC+AC共培养组。荧光素钠通透性试验结果显示：与Blank组比较，BMEC单层培养组在0.5、1.0、2.0 h时通透性降低（P <0.05）；与BMEC单层培养组比较，BMEC+AC共培养组在0.5、1.0、2.0 h时通透性降低（P <0.05）。4 h渗漏试验结果显示：与Control组相比，ICH组液面差降低，通透性增加。荧光素钠通透性试验结果显示：与Control组比较，ICH组在0.5、1.0、2.0 h时通透性增加（P <0.05）。细胞形态学观察结果显示：与Control组比较，ICH组内皮细胞形态明显皱缩、拉长；与ICH组比较，给药组内皮细胞形态未见明显皱缩、拉长，呈剂量依赖。与Control组比较，ICH组MMP-9蛋白相对表达量升高（P <0.05）,ZO-1、Occludin蛋白相对表达量降低（P <0.05）；与ICH组比较，GW0742高剂量组MMP-9蛋白相对表达量降低（P <0.05）,ZO-1、Occludin蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 GW0742对凝血酶诱导的血脑屏障破坏具有保护作用，其保护作用可能与抑制MMP-9的过度表达及促进紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达有关。

关键词

脑出血 / 血脑屏障 / GW0742 / MMP-9 / ZO-1 / Occludin