SMYD2介导高糖诱导大鼠肾成纤维细胞活化的机制研究

摘要

目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SMYD2)介导体外高糖环境下大鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）活化的可能机制。方法 复制糖尿病（DM）小鼠模型，经全自动生化分析仪检测各组小鼠血糖（BG）、血肌酐（Scr）水平，经苏木精-伊红、Masson染色观察小鼠肾组织病理改变，经Western blotting检测各组小鼠肾组织纤维连接蛋白（Fibronectin）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、组蛋白H3赖氨酸4三甲基化（H3K4me3）、SMYD2、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)蛋白表达，经免疫荧光检测各组小鼠肾组织α-SMA及SMYD2表达。复制体外DM细胞模型，使用正常糖（含5.5mmol/L葡萄糖）或高糖（含30.0 mmol/L葡萄糖）处理NRK-49F细胞，经Western blotting检测SMYD2、α-SMA及细胞外基质（ECM）成分蛋白表达；经CCK-8法检测SMYD2特异性抑制剂AZ505的细胞毒性；在AZ505处理/不处理的条件下，经Western blotting检测SMYD2、α-SMA、H3K4me3、Fibronectin、CollagenⅠ、NF-κB p65、NF-κB p-p65蛋白表达，经免疫荧光检测α-SMA、SMYD2及NF-κB p-p65在细胞中的表达及空间定位情况。结果 DM组血清BG、Scr水平高于NC组（P <0.05）。DM组肾组织α-SMA、Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2、H3K4me3、NF-κB p-p65蛋白相对表达量高于NC组（P <0.05），两组NF-κB p65蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。HG刺激不同时间点NRK-49F细胞α-SMA、Collagen I、Fibronectin、SMYD2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义（P <0.05）。40μmol/L组、60μmol/L组NRK-49F细胞存活率较0μmol/L组低（P <0.05）。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高（P <0.05）,HG+AZ505(20μmol/L)组较HG组低（P <0.05）。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA、H3K4me3、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高（P <0.05）,HG+AZ505组较HG组低（P <0.05）。HG组NRK-49F细胞NF-κB p-p65蛋白相对表达量较NG组高（P <0.05）,HG+AZ505组较HG组低（P <0.05），各组大鼠NRK-49F细胞NF-κB p65蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论SMYD2可介导高糖诱导的NRK-49F细胞活化，其机制可能与激活NF-κB细胞信号通路有关。

关键词

糖尿病 / 大鼠肾成纤维细胞 / 组蛋白赖氨酸甲基转移酶2 / AZ505