血管紧张素Ⅱ1型受体在氧化三甲胺促进ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化中的作用

摘要

目的 探讨血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）在氧化三甲胺（TMAO）促动脉粥样硬化中的作用。方法 用分子对接预测TMAO与AT1R可能的相互作用。将21只6周龄ApoE^-/-小鼠随机分为对照组、TMAO组、TMAO+替米沙坦组，每组7只。TMAO组在饲料中加1%胆碱复制高TMAO血症模型。TMAO+替米沙坦组采用替米沙坦10 mg/（kg·d）灌胃治疗。12周后采血，采用高效液相色谱串联质谱法测定血浆TMAO含量；油红O染色确定主动脉根部斑块面积；免疫组织化学法检测斑块内炎症因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和白细胞介素-6（IL-6）的浸润；构建AT1R表达质粒，转染293T细胞，加入TMAO（200μmol/L）或TMAO（200μmol/L）+替米沙坦（1μmol/L）作用0、5、10、15、30和60 min，检测AT1R下游信号通路ERK、PKC磷酸化活化情况。结果 分子对接预测到TMAO与AT1R之间的存在直接结合位点。3组小鼠主动脉根部斑块面积占比、斑块内MCP-1和IL-6表达比较，差异有统计学意义（P<0.05）;TMAO组较对照组主动脉根部斑块面积占比增加（P<0.05），斑块内MCP-1和IL-6表达升高（P<0.05），而替米沙坦组较TMAO组主动脉根部斑块面积占比下降（P<0.05），斑块内MCP-1和IL-6表达降低（P<0.05）。3组主动脉组织的AT1R、p-ERK1/2、p-PKC蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P<0.05）;TMAO组较对照组升高（P<0.05），而替米沙坦组较TMAO组下降（P<0.05）。在转染AT1R质粒的293T细胞中，TMAO组（200μmol/L）不同时间点的p-ERK1/2、p-PKC蛋白相对表达量比较，差异有统计学意义（P<0.05）；与0 min比较，作用15和30 min时p-ERK1/2蛋白相对表达量升高（P<0.05），作用10和15 min时p-PKC蛋白相对表达量升高（P<0.05）。而替米沙坦（1μmol/L）作用后，各个时间点的p-ERK1/2和p-PKC蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 TMAO加重ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化机制可能包含了其对AT1R的作用。

关键词

氧化三甲胺 / 血管紧张素Ⅱ1型受体 / 动脉粥样硬化