MicroRNA-132-3p靶向Nrf2加重脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的机制研究

摘要

目的 探讨microRNA-132-3p(miR-132-3p)靶向Nrf2加重脂多糖（LPS）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的机制。方法 用LPS刺激HUVECs建立体外脓毒症细胞模型，引起内皮细胞损伤。采用CCK-8法测定细胞活力，EdU法检测细胞增殖能力。转染miR-132-3p模拟物/抑制剂后，检测细胞迁移能力、乳酸脱氢酶（LDH）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平。通过荧光素酶报告基因验证miR-132-3p与其靶基因的结合。结果 对照组细胞活力、细胞阳性比高于LPS组（P <0.05）。LPS组LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平均较对照组升高（P <0.05）,SOD水平较对照组降低（P <0.05）。LPS组miR-132-3p mRNA相对表达量较对照组升高（P <0.05）,Nrf2 mRNA相对表达量较对照组降低（P <0.05）。LPS组Nrf2蛋白相对表达量较对照组降低（P <0.05）。LPS组与LPS+阴性对照组细胞活力比较，差异无统计学意义（P>0.05）,LPS+miR-132-3p模拟物组细胞活力较LPS组降低（P <0.05）,LPS+miR-132-3p抑制剂组细胞活力较LPS组升高（P <0.05）。LPS组与LPS+阴性对照组迁移细胞数比较，差异无统计学意义（P>0.05）,LPS+miR-132-3p模拟物组迁移细胞数较LPS组减少（P <0.05）,LPS+miR-132-3p抑制剂组迁移细胞数较LPS组增多（P <0.05）。LPS组与LPS+阴性对照组细胞划痕愈合率比较，差异无统计学意义（P>0.05）,LPS+miR-132-3p模拟物组细胞划痕愈合率较LPS组降低（P <0.05）,LPS+miR-132-3p抑制剂组细胞划痕愈合率较LPS组升高（P <0.05）。LPS组与LPS+阴性对照组LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA和SOD水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）;LPS+miR-132-3p模拟物组LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平均较LPS组升高（P <0.05）,SOD水平较LPS组降低（P <0.05）;LPS+miR-132-3p抑制剂组LDH、TNF-α、IL-6、IL-1β、ROS、MDA水平均较LPS组降低（P <0.05）,SOD水平较LPS组升高（P <0.05）。对照组与阴性对照组Nrf2-WT的荧光素酶活性比较，差异无统计学意义（P>0.05）,miR-132-3p模拟物抑制Nrf2-WT的荧光素酶活性（P <0.05）,miR-132-3p抑制剂增强Nrf2-WT的荧光素酶活性（P <0.05）。各组Nrf2-MUT的荧光素酶活性比较，差异无统计学意义（P>0.05）。LPS组与LPS+阴性对照组Nrf2 mRNA相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）,LPS+miR-132-3p模拟物组Nrf2 mRNA相对表达量较LPS组降低（P <0.05）,LPS+miR-132-3p抑制剂组Nrf2 mRNA相对表达量较LPS组升高（P <0.05）。LPS组与LPS+阴性对照组Nrf2蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）,LPS+miR-132-3p模拟物组Nrf2蛋白相对表达量较LPS组降低（P <0.05）,LPS+miR-132-3p抑制剂组Nrf2蛋白相对表达量较LPS组升高（P <0.05）。结论 miR-132-3p通过下调Nrf2的表达加重了LPS诱导的内皮细胞损伤，miR-132-3p可能是治疗脓毒症的潜在的新靶点。

关键词

脓毒症 / microRNA-132-3p / 内皮细胞 / 脂多糖 / 核因子红细胞2相关因子2