桔梗皂苷D对支原体肺炎小鼠肺组织转化生长因子-β₁、表皮生长因子表达的影响

摘要

目的 通过抑制纤维因子的表达，探究桔梗皂苷D对支原体肺炎的治疗机制。方法 将桔梗皂苷D与转化生长因子-β₁（TGF-β₁）进行结合能力测试，采用Biacore软件进行桔梗皂苷D与TGF-β₁的亲和力分析，并进行分子对接模拟实验。将雄性SPF级BALB/c小鼠60只分为对照组、模型组、阿奇霉素组、桔梗皂苷D高、中、低剂量组，每组10只。采用滴鼻法复制小鼠支原体肺炎模型，小鼠麻醉后经鼻滴入20μL含1×10～6 ccu/mL肺炎支原体的悬液，对照组采用等体积生理盐水滴鼻，1次/d，持续3 d。桔梗皂苷D高、中、低剂量组小鼠分别给予桔梗皂苷D 10.0、5.0、2.5 g/（kg·d），阿奇霉素组小鼠给予32.0 mg/（kg·d）的阿奇霉素，对照组和模型组小鼠则给予等体积的生理盐水，连续给药7 d。制备小鼠肺组织病理切片，采用苏木精-伊红（HE）染色和Masson染色观察肺组织的病理学变化。采用免疫组织化学染色（IHC）检测小鼠肺组织TGF-β₁和表皮生长因子（EGF）的蛋白阳性表达。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测TGF-β₁、EGF mRNA的表达。结果 Biacore分子互作和分子对接结果显示，桔梗皂苷D在体外能够与TGF-β₁蛋白进行特异性结合。各组小鼠肺组织的病理学分析显示，与模型组相比，桔梗皂苷D各剂量组小鼠肺组织中仅见少量肺泡壁充血，炎症细胞浸润显著减少，其组织结构与对照组和阿奇霉素组相似，且桔梗皂苷D高剂量组的炎症细胞浸润最少、肺泡壁充血范围最小。各组小鼠肺组织纤维化病理结果显示，与模型组相比，桔梗皂苷D各剂量组的胶原纤维均减少，与对照组和阿奇霉素组的肺组织相似，且桔梗皂苷D高、中剂量组的胶原纤维显著减少、仅有少量肺泡壁增厚。与对照组比较，模型组TGF-β₁阳性表达升高（P <0.05）；与模型组比较，桔梗皂苷D高、中、低剂量组TGF-β₁阳性表达均减少（P <0.05）。与对照组比较，模型组EGF蛋白阳性表达降低（P <0.05）；与模型组比较，桔梗皂苷D高、中剂量组EGF蛋白阳性表达均增多（P <0.05）。与对照组比较，模型组TGF-β₁ mRNA相对表达量升高（P <0.05）；与模型组相比，桔梗皂苷D高、中剂量组的TGF-β₁ mRNA相对表达量降低（P <0.05）。与对照组比较，模型组EGF mRNA相对表达量降低（P <0.05）；与模型组相比，桔梗皂苷D各给药组的EGF mRNA相对表达量均有不同程度升高（P <0.05）。结论 桔梗皂苷D能够有效改善肺炎支原体肺炎的肺间质纤维化，其作用机制可能是通过降低TGF-β₁表达、提高EGF表达来抑制上皮间质转化的发生。

关键词

支原体肺炎 / 桔梗皂苷D / 上皮间质转化 / 表皮生长因子 / 转化生长因子-β₁ / 分子互作