甘露清瘟方通过调控Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路抑制急性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的机制研究

摘要

目的 探讨甘露清瘟方对急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）大鼠B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)/凋亡效应蛋白Bax/Caspase-3信号通路的调节作用，以及其调控细胞凋亡的作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为6组，甘露清瘟方低、中、高剂量组，空白组，脂多糖模型组，地塞米松组，每组8只。进行ALI大鼠模型复制。模型复制前3 d，对6组大鼠进行灌胃给药，1次/d，连续3 d。空白组给予生理盐水1.0 mL/kg，脂多糖模型组给予脂多糖5 mg/kg，地塞米松组给予地塞米松溶液2 mg/kg，甘露清瘟方低、中、高、剂量组分别给予甘露清瘟方溶液0.60、1.20、2.40 g/kg；第3天给药后，将20 mg/kg脂多糖溶于100μL磷酸盐缓冲液（PBS）中，地塞米松组和甘露清瘟方各组大鼠气管内滴注；空白组大鼠气管内滴注等体积生理盐水。苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理形态学变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠血清及肺组织的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)水平；Western blotting检测各组大鼠肺组织Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测大鼠Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表达。结果 脂多糖模型组大鼠肺组织大面积实质化，肺泡结构不清，可见弥漫性炎症细胞浸润。与脂多糖模型组比较，地塞米松组和甘露清瘟方低、中、高剂量组血清及肺组织IL-6、TNF-α、IFN-γ水平降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达及m RNA表达增加（P<0.05）,Bax、Caspase-3蛋白表达及mRNA表达降低（P<0.05）。与甘露清瘟方低剂量组比较，甘露清瘟方中剂量组大鼠肺组织Caspase-3蛋白相对表达量下降（P<0.05），甘露清瘟方高剂量组大鼠肺组织Bcl-2蛋白相对表达量升高，Bax、Caspase-3蛋白相对表达量下降（P<0.05）。与甘露清瘟方低剂量组比较，甘露清瘟方中、高剂量组大鼠肺组织Bax、Caspase-3 mRNA相对表达量下降（P<0.05）,Bcl-2 mRNA相对表达量上升（P<0.05）；与甘露清瘟方中剂量组比较，甘露清瘟方高剂量组大鼠肺组织Bax mRNA相对表达量下降（P<0.05）,Bcl-2 mRNA相对表达量上升（P<0.05）。结论 甘露清瘟方可通过促进Bcl-2表达、抑制Caspase-3、Bax表达减轻肺损伤并降低肺组织细胞凋亡。

关键词

急性肺损伤 / 急性呼吸窘迫综合征 / 大鼠 / 甘露清瘟方 / 细胞凋亡 / B淋巴细胞瘤-2 / Bcl-2相关X蛋白 / 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3