MicroRNA-98对糖氧剥夺诱导的SH-SY5Y细胞损伤的影响

摘要

目的 探讨microRNA-98(miR-98)在人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中的表达及与缺血性脑卒中细胞凋亡和炎症损伤的关系。方法 采用氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）诱导SH-SY5Y细胞构建体外缺血性脑卒中细胞模型。细胞分为对照组（未经任何处理）和OGD/R组，采用MTT法检测细胞活力，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-98、Rho相关卷曲螺旋激酶2(ROCK2)表达；通过生物信息学的方法，寻找与ROCK2结合特异性好、稳定性强的miRNAs，采用双萤光素酶报告基因检测萤光素酶活性。Western blotting检测ROCK2蛋白相对表达量。将miR-98模拟物、miR-98抑制剂、pcDNA3.1-ROCK2和相应的阴性对照组转染到SH-SY5Y细胞中，并进行OGD/R处理。采用流式细胞术、TUNEL法检测细胞凋亡情况；采用吸光光度法检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3(Caspase-3)和胱天蛋白酶9(Caspase-9)水平；qRT-PCR检测TNF-α和IL-6表达。结果 与对照组相比，OGD/R组细胞活力降低，miR-98相对表达量降低（P<0.05）,ROCK2 mRNA相对表达量升高（P<0.05）。联合生物信息学和双萤光素酶实验分析发现ROCK2是miR-98的靶点之一（P<0.05）。与对照组相比，miR-98模拟物转染组miR-98 mRNA相对表达量升高（P<0.05），而ROCK2蛋白相对表达量降低（P<0.05）;miR-98抑制剂转染组miR-98 mRNA相对表达量降低，而ROCK2蛋白相对表达量升高（P<0.05）。与对照组相比，OGD/R组细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9水平升高（P<0.05）；与模拟物对照组相比，miR-98模拟物组细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9水平降低（P<0.05）；与miR-98模拟物组相比，miR-98模拟物组+pcDNA3.1-ROCK2组的细胞凋亡率、Caspase-3和Caspase-9水平升高（P<0.05）。与对照组相比，OGD/R组TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量升高（P<0.05）；与模拟物对照组相比，miR-98模拟物组TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量降低（P<0.05）；与miR-98模拟物组相比，miR-98模拟物组+pcDNA3.1-ROCK2组的TNF-α和IL-6 mRNA相对表达量升高（P<0.05）。结论 miR-98通过靶向抑制ROCK2的表达，抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡和炎症损伤，在缺血性脑卒中神经元损伤中发挥保护作用。

关键词

缺血性脑卒中 / microRNA / Rho相关卷曲螺旋激酶2 / 凋亡 / 炎症反应