原花青素B2靶向小胶质细胞调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对双环己酮草酰二腙小鼠髓鞘脱失的影响

摘要

目的 探究原花青素B2(PCB2)靶向小胶质细胞调节TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对双环己酮草酰二腙（CPZ）小鼠髓鞘脱失的影响。方法 将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为Normal组、PCB2组、CPZ组和CPZ+PCB2组。用含0.2%CPZ的饲料喂养CPZ组和CPZ+PCB2组6周，复制小鼠急性脱髓鞘模型，CPZ+PCB2组另采用PCB2治疗小鼠2周。采用高架十字迷宫和旷场实验评估小鼠行为学变化；黑金髓鞘染色、髓鞘碱性蛋白（MBP）及降解髓鞘碱性蛋白（dMBP）免疫荧光染色观察胼胝体区域髓鞘脱失情况；免疫荧光染色观察小胶质细胞标记物离子钙接合接头分子1(Iba1)及其M1型极化标志物诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、M2型极化标志物精氨酸酶1(Arg1)表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定脑组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β及IL-10水平；逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）和Western blotting实验检测脑组织匀浆中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)mRNA、蛋白表达水平。结果 与Normal组相比，CPZ组进入开放臂活动的总距离、进入开放臂次数均增加（P<0.05）,PCB2组与Normal组进入开放臂活动的总距离及进入开放臂的次数比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组进入开放臂活动的总距离、进入开放臂次数均降低（P<0.05）；与Normal组相比，CPZ组在旷场活动总距离、旷场中心区域活动距离均增加（P<0.05）,PCB2组与Normal组在旷场活动的总距离与在旷场中心区域活动距离比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组在旷场活动总距离、旷场中心区域活动距离均降低（P<0.05）。与Normal组相比，CPZ组TrueGold染色的胼胝体区域变小，着色浅而稀疏，平均光密度值降低（P<0.05）,PCB2组与Normal组TrueGold染色结果比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组True gold染色的胼胝体区域髓鞘脱失程度减轻，着色加深，平均光密度值升高（P<0.05）；与Normal组相比，CPZ组胼胝体区域MBP荧光强度下降（P<0.05）,PCB2组与Normal组MBP表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组MBP表达水平升高（P<0.05）；与Normal组相比，CPZ组胼胝体区域dMBP表达水平升高（P<0.05）,PCB2组与Normal组dMBP表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组dMBP表达水平下降（P<0.05）。与Normal组相比，CPZ组小鼠脑内Iba1表达水平增加（P<0.05）,PCB2组与Normal组Iba1表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组脑内Iba1表达水平降低（P<0.05）。与Normal组相比，CPZ组脑内Iba1/iNOS表达水平增多，Iba1/iNOS阳性细胞平均荧光强度增加（P<0.05）,PCB2组与Normal组Iba1/iNOS表达结果比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组脑内Iba1/iNOS表达水平降低，Iba1/iNOS阳性细胞平均荧光强度下降（P<0.05）。各组髓鞘区域Iba1/Arg1表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）。与Normal组相比，CPZ组TNF-α、IL-1β和IL-6的表达水平均均升高（P<0.05）,IL-10表达水平降低（P<0.05）;PCB2组与Normal组TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-10表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平均下降（P<0.05）,IL-10表达水平升高（P<0.05）。与Normal组相比，CPZ组TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平均升高（P<0.05）,PCB2组与Normal组TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组TLR4、MyD88和NF-κB的mRNA表达水平均降低（P<0.05）。与Normal组相比，CPZ组TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平均升高（P<0.05）;PCB2组与Normal组TLR4、MyD88和NF-κB p65蛋白表达水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；与CPZ组相比，CPZ+PCB2组TLR4、NF-κB和MyD88蛋白表达水平均降低（P<0.05）。结论 PCB2可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路及小胶质细胞向M1型极化，减轻神经炎症，缓解CPZ诱导的脱髓鞘。

关键词

髓鞘脱失 / 原花青素B2 / 神经炎症 / 小胶质细胞 / TLR4/MyD88/NF-κB信号通路