基于GRP78-ATF6通路探讨沉默SAT1对顺铂诱导耳蜗毛细胞损伤的影响

摘要

目的 探究精胺/亚精胺N[1]-乙酰基转移酶（SAT1）在顺铂诱导小鼠来源的永生化听觉毛细胞样细胞系（HEI-OC1）内质网应激中的作用机制，探讨SAT1对顺铂诱导耳蜗毛细胞损伤的影响。方法 将HEI-OC1细胞系按siNC、siSAT1、siNC+顺铂（30µmol/L）、siSAT1+顺铂（30µmol/L）分组，通过转染靶向SAT1的siRNA并联合顺铂处理，采用CCK-8法检测各组0、24、48、72 h细胞增殖活力；采用流式细胞术和透射电镜分析细胞凋亡率与超微结构变化；采用Western blotting法检测内质网应激标志物（IRE1α、XBP1s、GRP78、ATF6）及凋亡蛋白Caspase-12的表达。结果 4种SAT1-siRNA转染细胞24 h后均能沉默SAT1基因的表达，其中siSAT1-740组SAT1-siRNA的表达最低（P<0.05），因此选用siSAT1-740进行后续实验（表述为siSAT1）。Western blotting结果表明，siNC组的SAT1蛋白表达水平高于siSAT1组（P<0.05）。CCK-8实验结果表明，敲低SAT1能够显著缓解顺铂对HEI-OC1细胞的增殖抑制作用（P<0.05）。流式细胞术与透射电镜检测表明，敲低SAT1不仅能显著降低顺铂诱导的细胞早期、晚期及总凋亡率（P<0.05），还能从形态上明显改善染色质固缩与核碎裂等凋亡特征。Western blotting结果表明，各组细胞SAT1、IRE1α、XBP1s、GRP78、ATF6、Casepase-12蛋白表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；在顺铂诱导的内质网应激条件下，沉默SAT1能够上调GRP78蛋白的表达（P<0.05）；下调IRE1α、XBP1s、ATF6、Caspase-12的表达（P<0.05）。结论 沉默SAT1基因后可能通过调控GRP78/ATF6通路，拮抗顺铂导致的细胞损伤，为药物性耳毒性的防治提供了潜在新靶点。

关键词

精胺/亚精胺N[1]-乙酰基转移酶 / 内质网应激 / GRP78/ATF6信号轴 / 药物性耳毒性

基金资助

新疆维吾尔自治区自然科学基金青年科学基金（2023D01C226）; 新疆维吾尔自治区人民医院院内项目（20240201）