沙棘叶对HepG2细胞脂质沉积的影响及其机制研究

摘要

目的 探讨沙棘叶含药血清对HepG2细胞脂质沉积的干预作用及机制。方法 制备油酸-棕榈酸诱导的HepG2细胞脂质沉积模型，设置空白组、模型组、阳性药组、沙棘叶低剂量组（SJYD组）、沙棘叶中剂量组（SJYZ组）、沙棘叶高剂量组（SJYG组）。采用CCK-8法检测沙棘叶含药血清最适给药浓度；通过油红O染色和细胞内总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量测定，评估细胞内脂质沉积情况；运用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、乙酰辅酶A羧化酶（ACC）、肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)基因的相对表达量；并利用Western blotting测定P-AMPK/AMPK、P-ACC/ACC和CPT1蛋白的相对表达量。结果 CCK-8实验结果显示，0%、5%、10%、15%、20%、25%浓度含药血清组细胞存活率分别为（100±0.00）%、（91.39±1.96）%、（93.41±5.60）%、（81.50±6.09）%、（65.20±3.93）%、（62.23±2.91）%。0%含药血清组与10%含药血清组细胞存活率比较，差异无统计学意义（P >0.05），随着含药血清浓度升高（>10%），细胞存活率逐渐降低（P<0.05）。油红O染色结果显示，与空白组相比，模型组细胞经油酸-棕榈酸混合溶液诱导后产生大量脂滴；与模型组相比，阳性药组、SJYD组、SJYZ组、SJYG组HepG2细胞内脂质沉积明显减少。与空白组相比，模型组细胞内TG、TC含量均升高（P<0.05）；与模型组相比，阳性药组、SJYZ组、SJYG组细胞内TC、TG含量均降低（P<0.05）。与空白组相比，模型组HepG2细胞中AMPK、CPT1基因相对表达量均降低（P<0.05）；与模型组相比，阳性药组、SJYZ组、SJYG组AMPK基因相对表达量均升高，ACC基因相对表达量均降低，阳性药组和SJYZ组CPT1基因相对表达量均升高（P<0.05）。与空白组相比，模型组HepG2细胞中P-AMPK/AMPK、P-ACC/ACC及CPT1蛋白相对表达量均降低（P<0.05）；与模型组相比，各给药组P-AMPK/AMPK蛋白和CPT1蛋白相对表达量均升高，阳性药组、SJYZ组、SJYG组P-ACC/ACC蛋白相对表达量均升高（P<0.05）。结论 沙棘叶改善HepG2细胞脂质沉积，作用机制与调节AMPK/ACC/CPT1信号通路有关。

关键词

脂质沉积 / 沙棘叶 / AMPK/ACC/CPT1 / 信号通路 / 作用机制

基金资助

陕西省科技厅项目(2024CY-JJQ-10); 咸阳市科技局项目(2021ZDYF-SF-0044,2021-02-ZZ-008)