氢溴酸山莨菪碱对敌草快诱导的小鼠巨噬细胞的保护作用及其机制探讨

摘要

目的 探讨氢溴酸山莨菪碱（Ani-HBr）对敌草快（DQ）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞（PMs）损伤的保护作用及其机制。方法 选取PMs进行培养，用DQ刺激PMs 12 h后，用不同浓度的Ani-HBr(10、20μg/mL)干预24 h。采用CCK-8法检测细胞存活率；试剂盒检测ATP、ROS水平；流式细胞术分析巨噬细胞极化M1(F4/80CD86)和M2(F4/80CD206)比例；Western blotting检测线粒体生物合成核心因子核呼吸因子1(NRF1)、线粒体转录因子A(TFAM)、M1型[白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β]和M2型[转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10]巨噬细胞分泌细胞因子的表达，以及NF-κB通路关键蛋白P65及其磷酸化形式p-P65的表达。结果 DQ组细胞存活率低于Control组（P<0.05）,DQ+Ani-HBr-10组、DQ+Ani-HBr-20组细胞存活率高于DQ组（P<0.05），且DQ+Ani-HBr-20组细胞存活率高于DQ+Ani-HBr-10组（P<0.05）。DQ组ATP水平低于Control组（P<0.05）,ROS水平高于Control组（P<0.05）,DQ+Ani-HBr-10组、DQ+Ani-HBr-20组ATP水平均高于DQ组（P<0.05）,ROS水平低于DQ组（P<0.05）。DQ组NRF1、TFAM蛋白相对表达量均低于Control组（P<0.05）,DQ+Ani-HBr-10组、DQ+Ani-HBr-20组NRF1、TFAM蛋白相对表达量均高于DQ组（P<0.05）。DQ组P65、p-P65蛋白相对表达量均高于Control组（P<0.05）,DQ+Ani-HBr-10组、DQ+Ani-HBr-20组P65、p-P65蛋白相对表达量均低于DQ组（P<0.05）。DQ组M1型巨噬细胞比例高于Control组（P<0.05）,M2型巨噬细胞比例低于Control组（P<0.05）,DQ+Ani-HBr-10组、DQ+Ani-HBr-20组M1型巨噬细胞比例均低于DQ组（P<0.05）,M2型巨噬细胞比例均高于DQ组（P<0.05）。DQ组IL-6、IL-1β蛋白相对表达量均高于Control组（P<0.05）,TGF-β和IL-10蛋白相对表达量均低于Control组（P<0.05）。DQ+Ani-HBr-10组、DQ+AniHBr-20组IL-6、IL-1β蛋白相对表达量均低于DQ组（P<0.05）,TGF-β和IL-10蛋白相对表达量均高于DQ组（P<0.05）。结论 Ani-HBr对DQ诱导的PMs损伤具有保护作用，其机制可能与上调NRF1/TFAM蛋白表达、改善线粒体功能、抑制NF-κB通路激活，以及调节巨噬细胞极化平衡有关。

关键词

氢溴酸山莨菪碱 / 敌草快 / 巨噬细胞 / 作用机制

基金资助

重庆市自然科学基金面上项目(CSTB2024NSCQ-MSX0938)