LncRNA NALT1在Erastin诱导的结直肠癌细胞铁死亡中的作用及机制研究

摘要

目的：初步探讨长链非编码RNA(lncRNA)NALT1结合抑癌蛋白p53，促进Erastin介导的人类结直肠癌（CRC）细胞铁死亡的作用及其机制。方法：铁死亡诱导剂Erastin诱导RKO细胞发生铁死亡，使用流式细胞术、细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力，并评估细胞死亡敏感性。同时使用实时定量聚合酶链反应（qPCR）检测细胞内NALT1表达水平。通过慢病毒感染构建NALT1稳定过表达RKO细胞株和对照细胞株，进一步使用流式细胞术和免疫荧光检测NALT1对Erastin诱导的脂质过氧化的影响。铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)干预实验用于评估NALT1对Erastin介导的细胞活力变化、脂质过氧化水平及谷胱甘肽（GSH）含量的影响。RNA免疫共沉淀实验检测NALT1与p53蛋白的相互作用。此外，通过流式细胞术和免疫荧光评估过表达NALT1是否能够恢复敲低p53对Erastin诱导的脂质过氧化的抑制作用。结果：Erastin处理后，RKO细胞脂质过氧化水平显著升高，细胞活力下降，且细胞对Erastin的铁死亡敏感性增强，同时NALT1表达显著上调（P<0.05）。NALT1过表达可进一步增强Erastin介导的脂质过氧化和细胞铁死亡（P<0.05）。Fer-1处理显著缓解了Erastin诱导的脂质过氧化和细胞铁死亡，并部分逆转NALT1促进的脂质过氧化反应。在GSH含量检测实验中，Fer-1可在对照组中部分恢复GSH水平；但在NALT1过表达细胞中，该恢复作用不明显。结论：NALT1可能通过结合p53，上调CRC细胞脂质过氧化水平并增强对Erastin的敏感性，促进铁死亡。

关键词

lncRNA NALT1 / Erastin / 结直肠癌 / 铁死亡 / p53 / Ferrostatin-1

基金资助

广西自然科学基金区域高发疾病研究联合专项基金资助项目(No.2023GXNSFBA026202); 广西科技基地和人才专项基金资助项目(No.桂科AD22035047); 广西医科大学杰出青年人才培养计划