骨调蛋白调控膜性肾病足细胞焦亡的机制研究

摘要

目的:探讨骨调蛋白(OMD)在膜性肾病(MN)足细胞焦亡中的调控作用。方法:构建MN体外亚溶量C5b-9(sC5b-9)足细胞损伤模型，并通过si-RNA技术敲低OMD的表达，实验分为对照组(NC)、sC5b-9足细胞损伤模型组(sC5b-9)、OMD si-RNA敲低组(si-OMD)和sC5b-9足细胞损伤+OMD si-RNA敲低组(sC5b-9+si-OMD)。测定足细胞乳酸脱氢酶(LDH)的释放量、碘化丙啶(PI)染色的阳性率;利用蛋白质免疫印迹技术检测足细胞裂孔隔膜蛋白以及标记蛋白Nephrin、Podocin、WT-1;分析焦亡信号通路蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、GSDMD以及OMD、p38 MAPK、p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)的表达水平;通过免疫荧光技术观察焦亡执行蛋白GSDMD(N)的表达量及其在膜上的转移情况，对比不同处理组足细胞损伤和焦亡相关指标的差异。结果:与对照组比较，sC5b-9足细胞损伤模型组的LDH释放量和PI染色阳性率均有所上升，Nephrin、Podocin、WT-1表达降低，而OMD、p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)、NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-18、GSDMD表达均升高，GSDMD(N)表达量及其在膜上的转移也增加。与s C5b-9足细胞损伤模型组比较，sC5b-9足细胞损伤+OMD si-RNA敲低组的足细胞LDH释放量和PI染色阳性率均有所下降，Nephrin、Podocin、WT-1表达上升，OMD、p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)及焦亡信号通路蛋白表达均降低，GSDMD(N)表达量及其在膜上的转移减少，各组间p38 MAPK的表达差异无统计学意义。结论:OMD的敲低可减轻sC5b-9诱导的MN足细胞损伤和焦亡，其作用可能与抑制p38 MAPK磷酸化活化有关。

关键词

骨调蛋白 / 膜性肾病 / 亚溶量C5b-9 / 足细胞 / 焦亡

基金资助

无锡市卫生健康委科研项目(Q202308); 无锡市“太湖之光”科技攻关项目(K20241017); 无锡市转化医学研究所项目(LCYJ202340)