基于MDM2/P53/SLC7A11信号通路探究淫羊藿苷调控结肠癌细胞铁死亡的作用机制

摘要

目的 探讨淫羊藿苷通过鼠双微体2(MDM2)/P53/溶质载体家族7成员11(SLC7A11)信号通路调控结肠癌细胞铁死亡的作用及机制。方法 通过网络药理学和分子对接，预测及验证淫羊藿苷促进结肠癌细胞铁死亡的核心靶点。以结肠癌细胞HCT116为研究对象，设置溶剂对照组，淫羊藿苷低(5μmol/L)、中(15μmol/L)、高(25μmol/L)浓度组，铁死亡促进剂组；空载体对照组，MDM2过表达组，MDM2过表达+淫羊藿苷中浓度组。将MDM2过表达质粒、对照质粒，分别转染至HCT116结肠癌细胞内。CCK-8检测细胞增殖活性；应用比色法、微板法、TBA法分别检测亚铁离子、谷胱甘肽、丙二醛浓度；免疫荧光检测活性氧表达水平；蛋白质印迹法和实时荧光PCR法检测MDM2、P53、SLC7A11、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)蛋白及mRNA表达水平。结果 网络药理学筛选出淫羊藿苷影响结肠癌铁死亡的12个靶点，其中4个核心靶点MDM2、EGFR、PARP1、SRC,分子对接发现淫羊藿苷与MDM2具有较好的结合活性。与溶剂对照组比较，淫羊藿苷中、高浓度组细胞增殖活性、谷胱甘肽浓度、MDM2、SLC7A11和GPX4蛋白及mRNA表达均降低(P<0.01);丙二醛和亚铁离子浓度、活性氧水平、P53和PTGS2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01)。与MDM2过表达组比较，MDM2过表达+淫羊藿苷中浓度组细胞增殖活性、谷胱甘肽浓度、MDM2、SLC7A11和GPX4蛋白及mRNA表达均降低(P<0.01);丙二醛和亚铁离子浓度、活性氧水平、P53和PTGS2蛋白及mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01)。结论 淫羊藿苷可能通过抑制MDM2表达，调控MDM2/P53/SLC7A11信号通路，从而促进人结肠癌细胞HCT116铁死亡。

关键词

淫羊藿苷 / 鼠双微体2/P53/溶质载体家族7成员11信号通路 / 结肠癌细胞 / 铁死亡

基金资助

湖北省自然科学基金面上项目(No.2023AFB868)