芪芎左归复方调控骨髓间充质干细胞源性外泌体对衰老大脑中动脉闭塞-再灌注大鼠神经功能的影响

摘要

目的 研究芪芎左归复方调控骨髓间充质干细胞源性外泌体对衰老大脑中动脉闭塞-再灌注(MCAO/R)大鼠模型神经功能的影响。方法 按照随机数字表法将雄性SPF级SD大鼠分为5组：青年假手术组、衰老假手术组、衰老MCAO/R组、空白血清干预的外泌体组及含药血清干预的外泌体组，每组15只。除青年假手术组(注射生理盐水)外，其余各组通过每日腹腔注射D-半乳糖(500 mg/kg,连续8周)建立衰老大鼠模型。末次注射后，衰老MCAO/R组、空白血清干预的外泌体组及含药血清干预的外泌体组采用改良线栓法复制MCAO/R模型，假手术组仅分离血管与神经。采用差速离心法提取外泌体，经透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析及蛋白质印迹法鉴定。术后24、72 h,外泌体组经尾静脉注射等体积的空白血清干预的外泌体或含药血清(10%)干预的外泌体。术后7 d取材。通过2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色、Zea-Longa评分、Morris水迷宫实验分别检测脑梗死面积、神经功能缺损程度及学习记忆能力；采用HE染色、尼氏染色、高尔基-考克斯染色观察脑组织病理形态学变化、尼氏体数量及神经元树突棘密度；利用免疫荧光及蛋白质印迹法检测神经元核抗原(NeuN)、微管相关蛋白2(MAP-2)蛋白表达情况。结果 与青年假手术组比较，衰老假手术组大鼠学习记忆能力下降，表现为逃避潜伏期延长、目标象限停留时间缩短及穿越平台次数减少，同时尼氏体数量减少、神经元树突棘密度降低，NeuN和MAP-2蛋白表达下调(P<0.05);相较于衰老假手术组，衰老MCAO/R组大鼠神经功能缺损评分增加，逃避潜伏期延长、目标象限停留时间缩短、穿越平台次数减少，梗死区脑组织神经元坏死，尼氏体数量减少，神经元树突棘密度降低，NeuN及MAP-2蛋白表达下调(P<0.05);与衰老MCAO/R组比较，空白血清干预的外泌体组与含药血清干预的外泌体组神经功能缺损评分降低，脑组织病理损伤改善，尼氏体数量增多，逃避潜伏期缩短、目标象限停留时间延长、穿越平台次数增加，神经元树突棘密度增加，NeuN和MAP-2蛋白表达上调(P<0.05),且含药血清干预的外泌体组改善效果均优于空白血清干预的外泌体组(P<0.05)。结论 芪芎左归复方可能通过调控骨髓间充质干细胞源性外泌体，缓解衰老MCAO/R大鼠的脑组织病理学变化及减轻神经元损伤，从而提高学习记忆能力及恢复神经功能。

关键词

芪芎左归复方 / 神经功能 / 脑卒中 / 大脑中动脉闭塞-再灌注 / 外泌体 / 大鼠

基金资助

中原科技创新领军人才项目(No.224200510027); 河南省“双一流”创建学科中医学科学研究专项(No.HSRP-DFCTCM-2023-1-04); 河南中医药大学第一附属医院“博士科研启动基金”项目(No.2024BSJJ022); 河南羚锐制药股份有限公司横向科研项目(No.KY-A0739); 2025年度河南省医学科技计划项目(No.LHGJ20250418)