参知健脑方调控Notch1/RBP-Jκ/HES-1信号通路改善脑小血管病性认知障碍的机制研究

摘要

目的 探讨参知健脑方对脑小血管病性认知障碍的作用及机制。方法 动物实验中，采用随机数字表法将57只SPF级雄性SD大鼠分为假手术组、造模组、参知健脑方组(2.21 g/kg)各15只及盐酸美金刚组(2.1 mg/kg)12只。假手术组行假手术，其余各组采用双侧颈总动脉永久性结扎术制备脑小血管病大鼠模型。各给药组灌胃相应剂量药物，假手术组和造模组予等体积无菌反渗透水灌胃，每日1次，连续4周。采用莫里斯水迷宫实验评估大鼠认知功能；HE染色和尼氏染色观察大鼠海马CA1区病理形态；免疫荧光法检测大鼠海马CA1区整合素αM(CD11b)、离子钙结合衔接分子1(IBA-1)荧光表达；酶联免疫吸附测定法检测大鼠海马组织和血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量；蛋白质印迹法和荧光定量PCR法检测大鼠海马组织神经源位点缺口同源蛋白1(Notch1)、重组信号结合蛋白Jκ(RBP-Jκ)、发状分裂相关增强子-1(HES-1)蛋白及mRNA表达。细胞实验中，采用氧糖剥夺/再灌注法及条件培养基共培养法构建BV2及Bend.3细胞共培养模型，设BV2/Bend.3-正常1组，BV2/Bend.3-模型1组，BV2/Bend.3-盐酸美金刚组(10μmol/L),BV2/Bend.3-参知健脑方低、中、高剂量组(0.025、0.050、0.100 g/L);细胞回复实验采用Notch1过表达慢病毒转染BV2细胞，再进行造模与共培养，设BV2/Bend.3-正常2组、BV2/Bend.3-模型2组、BV2/Bend.3-Notch1过表达组、BV2/Bend.3-阴性对照组、BV2/Bend.3-参知健脑方组(0.050 g/L)、BV2/Bend.3-Notch1过表达+参知健脑方组(0.050 g/L);正常组、模型组不予干预，各给药组加入相应药物进行培养。采用免疫荧光法检测BV2细胞CD11b、IBA-1荧光表达；酶联免疫吸附测定法检测Bend.3细胞IL-6、IL-1β、TNF-α含量；蛋白质印迹法和荧光定量PCR法检测BV2细胞Notch1、RBP-Jκ、HES-1蛋白及mRNA表达。结果 动物实验中，与假手术组比较，造模组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数及目标象限停留时间百分比降低，海马CA1区神经元损伤，CD11b、IBA-1平均荧光强度升高，IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高，Notch1、RBP-Jκ、HES-1蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);参知健脑方干预后，上述病理改变得到改善(P<0.05)。细胞实验中，与BV2-正常1组比较，BV2-模型1组细胞CD11b、IBA-1平均荧光强度升高，Notch1、RBP-Jκ、HES-1蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);与Bend.3-正常1组比较，Bend.3-模型1组细胞IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05);参知健脑方中剂量及盐酸美金刚干预后，上述病理改变得到改善(P<0.05)。细胞回复实验中，与BV2-正常2组比较，BV2-模型2组及BV2-Notch1过表达组细胞CD11b、IBA-1平均荧光强度升高，Notch1、RBP-Jκ、HES-1蛋白及mRNA表达升高(P<0.05);与Bend.3-正常2组比较，Bend.3-模型2组及Bend.3-Notch1过表达组细胞IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05)。参知健脑方干预后，上述病理改变得到改善(P<0.05)。结论 参知健脑方可能通过下调Notch1/RBP-Jκ/HES-1信号通路，抑制小胶质细胞激活，减轻炎症反应，保护神经血管单元，改善脑小血管病性认知障碍。

关键词

参知健脑方 / 脑小血管病性认知障碍 / 神经炎症 / 神经源位点缺口同源蛋白1/重组信号结合蛋白Jκ/发状分裂相关增强子1信号通路 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82274466); 广东省自然科学基金项目(No.2023A1515011140); 深圳市“医疗卫生三名工程”项目(No.SZZYSM202105010)