填髓通络方调控miR-143-3p/NRG-1轴治疗脑小血管病模型大鼠的作用及机制

摘要

目的 探讨填髓通络方治疗脑小血管病(CSVD)模型大鼠的作用及其机制。方法 采用随机数字表法将60只SPF级雄性SD大鼠分为假手术组(n=9)和造模组(n=51)。造模组采用双侧颈总动脉永久结扎法构建CSVD大鼠模型，将造模成功的36只大鼠采用随机数字表法分为模型组、填髓通络方低剂量组(14.4 g/kg)、填髓通络方高剂量组(28.8 g/kg)和盐酸多奈哌齐组(0.45 mg/kg),每组9只。各给药组大鼠分别灌胃相应药物，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水，1次/d,连续28 d。采用莫里斯水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力；HE染色观察大鼠海马区病理情况；双萤光素酶报告实验验证微小RNA-143-3p(miR-143-3p)和神经调节蛋白-1(NRG-1)靶向关系；免疫荧光染色观察大鼠脑白质神经元核抗原(NeuN)和海马组织NRG-1荧光表达；免疫组织化学染色观察大鼠海马组织NRG-1阳性表达；TUNEL染色观察大鼠海马组织神经元凋亡情况；蛋白质印迹法检测大鼠海马组织NRG-1、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、B细胞淋巴瘤2相关死亡促进因子(Bad)蛋白表达；实时荧光定量PCR法检测大鼠海马组织miR-143-3p和NRG-1 mRNA表达。结果 与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数减少、目标象限停留时间缩短，海马区神经元病理损伤明显，脑白质NeuN和海马组织NRG-1平均荧光强度降低，海马组织NRG-1平均光密度值降低，神经元凋亡率升高，NRG-1、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达降低，Bad蛋白表达升高，miR-143-3p mRNA表达升高，NRG-1 mRNA表达下降(P<0.05)。与模型组比较，填髓通络方低、高剂量组与盐酸多奈哌齐组大鼠逃避潜伏期缩短、目标象限停留时间延长，海马区神经元病理改善明显，脑白质NeuN和海马组织NRG-1的平均荧光强度增加，海马组织NRG-1平均光密度值升高，神经细胞凋亡率降低，NRG-1、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达升高，Bad蛋白表达降低，miR-143-3p mRNA表达降低，NRG-1 mRNA表达升高(P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验显示miR-143-3p和NRG-1存在靶向关系。结论 填髓通络方可能通过调控miR-143-3p/NRG-1轴及其下游PI3K/Akt信号通路，减轻海马神经元细胞损伤、抑制细胞凋亡、减少神经元丢失，进而改善CSVD大鼠认知障碍。

关键词

脑小血管病 / 填髓通络方 / 微小RNA-143-3p / 神经调节蛋白-1 / 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路 / 细胞凋亡 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.81673943); 全国中医药创新骨干人才培训项目(国中医药人教函[2019]128号); 河南省重点研发与推广专项(No.242102310564)