揉拨手法改善“筋出槽”模型大鼠的机制研究

摘要

目的 探讨揉拨手法对慢性骨骼肌损伤“筋出槽”模型大鼠的治疗作用及其机制。方法 将24只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、揉拨手法组，每组8只。除空白组外，其余两组采用上肢悬吊法构建“筋出槽”大鼠模型。造模后，揉拨手法组进行手法干预(以拇指指腹为主要着力点，食指辅助发力，以温和适度的力按压在肱三头肌位置，环形揉动，往返操作5次；拨法操作时来回拨动，重复操作5次，两种手法交替操作10遍),每日1次，连续14 d。干预后，采用HE、Masson染色观察大鼠肱三头肌组织病理改变；蛋白质组学筛选揉拨手法干预的靶点及信号通路；透射电镜观察大鼠肱三头肌肌细胞膜超微结构；免疫共沉淀检测大鼠肱三头肌组织整合素β1(Integrinβ1)和陷窝蛋白2(Caveolin2)相互作用；蛋白质印迹、实时荧光PCR法检测大鼠肱三头肌组织力学感受蛋白Caveolin2、Integrinβ1,细胞迁移相关因子黏着斑激酶(FAK)、Ras同源家族成员A(RhoA)、Rho激酶1(ROCK1),成肌相关因子结蛋白(Desmin)蛋白和mRNA表达。结果 空白组大鼠肱三头肌细胞形态规则、未见炎症细胞浸润和纤维化；模型组大鼠肱三头肌细胞大小不等、可见炎症细胞浸润和纤维化；与模型组比较，揉拨手法组肱三头肌组织形态改善，炎症细胞浸润减轻，肱三头肌组织纤维化面积百分比明显降低(P<0.05)。蛋白质组学结果显示，与空白组比较，模型组共有140个差异表达蛋白，其中，上调蛋白42个、下调蛋白98个；与模型组比较，揉拨手法组共有292个差异表达蛋白，其中，上调蛋白246个、下调蛋白46个。GSEA-京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析显示，与本病相关的前10条信号通路中，黏着斑通路富集最高，Caveolin2、Integrinβ1蛋白及其下游FAK/RhoA/ROCK1通路可能是揉拨手法发挥治疗作用的靶点和通路。进一步验证，透射电镜可见，与模型组比较，揉拨手法组肱三头肌细胞膜表面存在大量凹陷。Caveolin2与Integrinβ1存在相互作用。与空白组比较，模型组肱三头肌组织Caveolin2、Integrinβ1、RhoA、ROCK1、Desmin蛋白和mRNA表达降低，磷酸化FAK/FAK降低(P<0.05);与模型组比较，揉拨手法组肱三头肌组织Caveolin2、Integrinβ1、RhoA、ROCK1、Desmin蛋白和mRNA表达增加，磷酸化FAK/FAK增加(P<0.05)。结论 揉拨手法可促进“筋出槽”模型大鼠慢性骨骼肌损伤的修复，其作用机制可能与骨骼肌组织中力学感受蛋白Caveolin2和Integrinβ1升高及下游FAK/RhoA/ROCK1信号通路的激活有关。

关键词

慢性骨骼肌损伤 / 揉拨手法 / 陷窝蛋白2 / 整合素β1 / 黏着斑激酶/Ras同源基因家族成员A/Rho激酶1信号通路 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82374481,No.82374467); 上海市慢性筋骨病临床医学研究中心项目(No.20MC1920600); 上海市临床重点专科“中医骨伤科”项目(No.shslczdzk03901)