探讨温和灸通过调控AMPK/PGC-1α信号抑制氧化应激反应保护早发性卵巢功能不全模型小鼠卵巢功能的作用

摘要

目的 探索温和灸对早发性卵巢功能不全(POI)模型小鼠卵巢功能的保护作用及其作用机制。方法 将80只动情周期正常的SPF级雌性ICR小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、艾灸组、艾灸+Compound C组，每组20只。空白组每日仅灌胃生理盐水，其余组通过连续14 d灌胃雷公藤多苷[75 mg/(kg·d)]造模。艾灸组于每日灌胃雷公藤多苷1 h后进行温和灸，双侧“肾俞”或“关元”“中脘”隔日交替，每穴每次灸10 min;艾灸+Compound C组于每日灌胃雷公藤多苷30 min后腹腔注射Compound C(10 mg/kg),1 h后温和灸，操作同艾灸组。温和灸每日1次，连续14 d。通过卵巢指数、动情周期紊乱率、卵巢组织形态、各级卵泡数量和血清性激素水平等指标评价艾灸对卵巢的保护作用，实时荧光定量PCR法、免疫组织化学法检测卵巢组织中腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α (PGC-1α)mRNA及蛋白表达，酶联免疫吸附测定法、萤光素酶法、化学荧光法分别检测血清中性激素、氧化应激标志物及卵巢颗粒细胞中三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)水平。结果 与模型组比较，艾灸组小鼠卵巢指数升高(P<0.05),动情周期紊乱率下降(P<0.05),闭锁卵泡数量减少(P<0.05),原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡数量均增加(P<0.05)。血清抗米勒管激素、雌二醇水平升高(P<0.05),卵泡刺激素水平降低(P<0.05);AMPK及PGC-1α的蛋白和mRNA表达上调(P<0.05);血清超氧化物歧化酶活性增加、丙二醛含量降低，颗粒细胞ATP浓度增加、ROS平均荧光强度降低(P<0.05)。而温和灸干预前先给予Compound C,对卵巢的保护作用则明显下降，表现为小鼠卵巢指数降低(P<0.05),动情周期紊乱率升高(P<0.05),闭锁卵泡数量增加(P<0.05),原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和窦卵泡数量均减少(P<0.05)。结论 艾灸可通过促进AMPK/PGC-1α信号的活化，抑制小鼠体内氧化应激反应，调节激素水平，从而保护卵巢功能。

关键词

温和灸 / 早发性卵巢功能不全 / 腺苷酸激活蛋白激酶 / 过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子1α / 氧化应激反应 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82374599); 江苏省中医药领军人才培养项目(No.SLJ0316)