填精化浊方通过AMPK/PGC-1α通路调控脂代谢改善慢性肾脏病模型小鼠肾纤维化的机制研究

摘要

目的 基于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助因子1α(PGC-1α)信号通路介导的脂肪酸代谢探讨填精化浊方对慢性肾脏病(CKD)模型小鼠肾纤维化的干预作用及机制。方法 48只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、非奈利酮组(10 mg/kg)、填精化浊方组(3.34 g/kg),每组12只。除正常组外，其余小鼠均予以含0.2%腺嘌呤的高脂饮食建立CKD小鼠模型，连续造模4周；同时给药组每日灌胃相应药物，正常组和模型组灌胃等体积无菌生理盐水，持续干预8周。检测小鼠24 h尿蛋白总量(24 h-UTP)、血清肌酐(CREA)、血清尿素(UREA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),计算尿白蛋白与肌酐比值(UACR);采用HE、Masson、油红O染色观察肾组织病理改变；酶联免疫吸附法测定尿液中肾小管损伤标志物肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平；免疫组化法检测肾组织I型胶原蛋白(Col-I)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、磷酸化AMPK(p-AMPK)、PGC-1α定位表达；免疫荧光法检测肾组织活性氧(ROS)水平，TUNEL荧光检测肾组织细胞凋亡情况；蛋白质免疫印迹法检测肾组织中波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉碱棕榈酰转移酶1α(CPT1α)、酰基辅酶A氧化酶1(Acox1)、AMPK、p-AMPK、PGC-1α蛋白表达。结果 与正常组比较，模型组小鼠24 h-UTP、CREA、UREA、TC、TG、UACR均升高(P<0.05),且肾脏组织病理变化明显，尿液KIM-1、NGAL含量升高(P<0.05);肾组织脂质异位沉积明显，且ROS荧光面积和TUNEL阳性率均升高(P<0.05);肾组织Col-I、α-SMA蛋白定位表达增多(P<0.05);肾组织Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),E-cadherin、PPARα、CPT1α、Acox1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α蛋白表达均降低(P<0.05)。与模型组比较，非奈利酮组和填精化浊方组小鼠24 h-UTP、CREA、UREA、TC、TG、UACR均降低(P<0.05),肾组织纤维化得到改善，尿液KIM-1、NGAL含量降低(P<0.05);肾组织Col-I、α-SMA蛋白定位表达降低(P<0.05);肾脏脂质沉积状况得到改善，且肾组织ROS荧光面积和TUNEL阳性率均降低(P<0.05);肾组织Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),E-cadherin、PPARα、CPT1α、Acox1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α蛋白表达均升高(P<0.05)。结论 填精化浊方能够改善CKD肾纤维化，其机制可能与调节AMPK/PGC-1α信号通路，促进脂肪酸氧化相关蛋白表达，从而清除肾组织脂质异位沉积，抑制脂质肾毒性有关。

关键词

填精化浊方 / 慢性肾脏病 / 肾纤维化 / 脂代谢 / 腺苷酸活化蛋白激酶/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助因子1α信号通路 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82574945); 中央高水平中医医院临床科研业务费资助(No.DZMG-XZYY-23005); 中国中医科学院科技创新工程项目(No.CI2023C003LH); 中华中医药学会联合攻关项目(No.2023DYPLHGG-06); 北京市自然科学基金项目(No.7244487); 2024年度北京中医药大学研究生自主科研课题(No.ZJKT2024004)