电针对高脂血症模型大鼠肝细胞脂噬的影响

摘要

目的 探究电针通过调控哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mTORC1)介导的肝细胞脂噬治疗高脂血症模型大鼠的作用机制。方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为空白组(n=6)和造模组(n=24)。采用高脂饲料喂养法(饲喂8周)构建高脂血症大鼠模型。造模成功后，将造模组按随机数字表法分为模型组、电针组、mTORC1抑制剂组、电针+mTORC1激动剂组，每组6只。除空白组外，其他大鼠维持高脂饲料喂养。电针组和电针+mTORC1激动剂组大鼠于双侧“丰隆”行电针干预(疏密波2 Hz/100 Hz,电流强度1 mA),每日1次，每次30 min; mTORC1抑制剂组大鼠腹腔注射mTORC1抑制剂雷帕霉素(2 mg/kg),每日1次；电针+mTORC1激动剂组大鼠腹腔注射mTORC1激动剂MHY1485(10 mg/kg),每日1次。每周连续干预5 d,持续4周。干预结束后，采用全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TAG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)含量；HE和油红O染色观察肝脏病理学变化和脂质沉积情况；观察肝脏情况并计算肝指数；酶联免疫吸附测定法检测肝脏组织TC、TAG含量；透射电镜观察肝脏组织超微结构；免疫荧光法检测肝脏组织脂滴包被蛋白2(PLIN2)和微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ蛋白平均荧光强度；蛋白质印迹法检测肝脏组织LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、mTORC1蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组大鼠血清TC、TAG、LDL-C、ALT、AST、FFA含量升高，HDL-C含量降低(P<0.05);肝指数和肝脏组织TC、TAG含量升高(P<0.05);肝脏组织可见明显脂质蓄积，肝细胞内大量脂滴积聚，线粒体形态异常，可见少量自噬体；PLIN2平均荧光强度升高，LC3-Ⅱ平均荧光强度降低(P<0.05);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低，p-mTOR/mTOR增加，mTORC1蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组比较，mTORC1抑制剂组和电针组大鼠血清TC、TAG、LDL-C、ALT、AST、FFA含量降低(P<0.05);肝指数和肝脏组织TC、TAG含量降低(P<0.05);肝脏组织脂质蓄积明显减轻，可见肝细胞自噬体；PLIN2平均荧光强度降低，LC3-Ⅱ平均荧光强度升高(P<0.05);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ增加，p-mTOR/mTOR、mTORC1蛋白表达降低(P<0.05)。与电针组和mTORC1抑制剂组比较，电针+mTORC1激动剂组大鼠血清TAG、TC、LDL-C、ALT、AST、FFA含量增加(P<0.05);肝指数和肝脏组织TC、TAG含量升高(P<0.05);肝脏组织脂质蓄积加重，未见肝细胞自噬体未见；PLIN2平均荧光强度升高，LC3-Ⅱ平均荧光强度降低(P<0.05);LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ降低，p-mTOR/mTOR、mTORC1蛋白表达增加(P<0.05)。结论 电针“丰隆”可能通过抑制mTORC1,促进肝细胞脂噬，从而改善高脂血症大鼠血脂水平。

关键词

电针 / 丰隆 / 高脂血症 / 脂噬 / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82405577,No.82274663); 湖北省技术创新计划项目(No.2024BCB010)