补中益气汤调控miR-146-5p介导TLR4/MyD88/TRAF6通路干预自身免疫性甲状腺炎免疫调控的机制研究

摘要

目的 基于miR-146-5p介导Toll样受体4（TLR4）/髓分化因子88（MyD88）/肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）通路探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠免疫调控的干预机制。方法 将48只8周龄NOD.H-2^h4小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、补中益气汤低剂量组、补中益气汤中剂量组、补中益气汤高剂量组、硒酵母片组共6组，每组8只。正常组自由饮用蒸馏水，其余各组自8周龄起自由饮用含0.05%碘化钠水，持续8周以诱导AIT模型。造模成功后，补中益气汤低、中、高剂量组分别予4.10、8.19、16.38 g/kg补中益气汤灌胃，硒酵母片组给予0.026 mg/kg硒酵母片混悬液灌胃，正常组和模型组予等量蒸馏水灌胃，每灌胃6 d休息1 d,连续8周。HE染色法观察小鼠甲状腺组织病理学形态变化；酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清甲状腺球蛋白抗体（TgAb）、甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17A（IL-17A）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平；实时荧光PCR加尾法检测小鼠甲状腺组织miR-146-5p表达；流式细胞术检测脾脏辅助性T细胞17（Th17）、调节性T细胞（Treg）细胞亚群分布；蛋白质印迹法检测小鼠甲状腺组织TLR4、MyD88、TRAF6、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）蛋白水平。结果 与正常组比较，模型组甲状腺滤泡上皮细胞结构被破坏，淋巴细胞浸润明显；血清TgAb、TPOAb水平升高（P<0.05）,IL-6、IL-17A、TNF-α水平升高（P<0.01）,IL-10水平降低（P<0.05）;甲状腺组织miR-146-5p的表达升高（P<0.01）;脾脏Th17细胞比例及Th17/Treg比例升高（P<0.01）;甲状腺组织TLR4、MyD88、TRAF6、p-JNK/JNK、p-p38MAPK/p38MAPK及p-p38MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05）。与模型组比较，中药各组和硒酵母片组上皮细胞结构有不同程度改善，淋巴细胞浸润程度有所缓解；补中益气汤高剂量组和硒酵母片组血清中TPOAb水平降低（P<0.05）,中药各组和硒酵母片组血清中TgAb水平降低（P<0.05）,IL-6、IL-17A、TNF-α水平降低（P<0.01）,补中益气汤中、高剂量组和硒酵母片组血清中IL-10水平升高（P<0.05）;补中益气汤低剂量组甲状腺组织miR-146-5p水平升高（P<0.01）,而补中益气汤中、高剂量组和硒酵母片组甲状腺组织miR-146-5p水平降低（P<0.05）;补中益气汤高剂量组和硒酵母片组脾脏Treg细胞比例升高（P<0.05）,中药各组和硒酵母片组Th17细胞比例及Th17/Treg比例降低（P<0.05）;中药各组和硒酵母片组甲状腺组织TLR4、TRAF6、p-p38MAPK/p38MAPK、p-p38MAPK蛋白表达水平降低（P<0.05）,补中益气汤中、高剂量组和硒酵母片组甲状腺组织MyD88、p-JNK/JNK蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论 补中益气汤可能是通过干预miR-146-5p介导的TLR4/MyD88/TRAF6通路，对AIT小鼠进行免疫调控减轻甲状腺淋巴细胞浸润，发挥治疗AIT的作用。

关键词

补中益气汤 / miR-146-5p / 自身免疫性甲状腺炎 / 免疫调控 / Toll样受体4/髓分化因子88/肿瘤坏死因子受体相关因子6通路 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金青年科学基金项目(No.82104805); 辽宁省教育厅高校基本科研项目储备项目(No.2024-JYTCB-067);辽宁省教育厅自然科学类高校基本科研项目(No.LJ212510162016)