基于PI3K/Akt/NF-κB通路研究百秋李醇对肺热证小鼠的改善作用

摘要

目的 基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/核转录因子-κB(NF-κB)通路研究百秋李醇对肺热证小鼠的改善作用。方法 首先，运用网络药理学预测百秋李醇治疗肺热证的潜在靶点，构建“成分-疾病-关键靶点”网络图进行通路分析。随后，将40只BALB/c小鼠用随机数字表法分为空白组、模型组、金银花组(5 g/kg)和百秋李醇低、高剂量组(20、40 mg/kg),每组8只。各组小鼠麻醉后，空白组给予磷酸盐缓冲液(PBS) 50μL滴鼻，其余各组以10～3 TCID50流感病毒PBS稀释液50μL滴鼻感染，感染2 h后分别给予相应药液，1次/d,连续7 d。每日观察小鼠一般情况、称量体质量并计算体质量增长率，1、3、5、7 d测量肛温。小鼠处死后，取小鼠肺、脾、胸腺组织称重，计算脏器指数及肺抑制率；使用苏木素-伊红染色法观察小鼠肺组织病理变化；酶联免疫吸附测定检测小鼠肺部炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量，下丘脑发热指标前列腺素E2(PGE2)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量，血清中丙酮酸含量，肝脏样本中钠钾ATP酶、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)活性及肝糖原含量；蛋白质印迹法检测小鼠肺组织中磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)/NF-κB p65蛋白的表达。结果 运用网络药理学筛选出百秋李醇与肺热证的关联靶点135个，核心靶标为STAT3、H1F1A和NF-κB1。在动物实验中，与模型组比较，百秋李醇能够有效缓解流感病毒诱导的肺热证小鼠肛温的上升(P<0.01),抑制小鼠肺部炎性损伤，抑制小鼠肺组织TNF-α、IL-6表达(P<0.01)及PI3K/Akt/NF-κB通路的激活，降低肺热证小鼠下丘脑PGE2、cAMP的水平(P<0.01)及减少肝糖原(P<0.01)和丙酮酸(P<0.01)含量，同时，提高肝脏中SDH、LDH、钠钾ATP酶的活性(P<0.01)。结论 百秋李醇通过抑制PI3K/Akt/NF-κB通路激活，抑制炎症因子与炎症损伤，调控下丘脑发热指标及能量代谢等方式，改善肺热证小鼠症状。

关键词

百秋李醇 / 肺热证 / 磷脂酰肌醇3激酶/Akt/核转录因子-κB通路 / 能量代谢 / 芳香中药 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82141217)