心阳片对慢性心力衰竭小鼠心肌细胞铁死亡的作用及机制研究

摘要

目的 基于铁死亡探讨心阳片改善慢性心力衰竭小鼠的作用及机制。方法 采用随机数字表法将60只C57BL/6J小鼠分为假手术组，模型组，心阳片低(0.34 g/kg)、中(0.68 g/kg)、高(1.36 g/kg)剂量组和培哚普利组(0.607 mg/kg),每组10只。除假手术组外，其余各组予以主动脉弓缩窄术构建慢性心力衰竭小鼠模型。造模结束后第3天，各给药组灌胃相应药物，假手术组和模型组灌胃等体积纯水，每日1次，连续8周。采用心脏超声检测小鼠心脏结构及功能；苏木素-伊红染色检测小鼠心肌组织病理变化；Masson染色检测小鼠心肌组织纤维化面积比率；实时荧光PCR法检测小鼠心肌组织心房利尿钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、Ⅲ型胶原蛋白α(Col3α)、肌球蛋白重链7(MYH7)mRNA表达；透射电镜检测心肌细胞线粒体超微结构；活性氧(ROS)染色检测心肌组织ROS平均荧光强度；微量法检测心肌组织SOD活性；免疫荧光法检测心肌细胞磷酸化组蛋白去乙酰化酶2(p-HDAC2)平均荧光强度；蛋白质印迹法检测小鼠心肌组织核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)、p-HDAC2、尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、胱氨酸谷氨酸反向转运蛋白(xCT)蛋白表达。结果 与假手术组比较，模型组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)降低，左室收缩末期内径(LVESD)及左室舒张末期内径(LVEDD)升高，心肌组织纤维化面积比率增加，ANP、BNP、Col3α1、MYH7 mRNA相对表达水平升高，ROS平均荧光强度增加，SOD活性降低，p-HDAC2平均荧光强度增加，p-HDAC2、NOX1蛋白相对表达水平升高，Nrf2、GPX4、xCT蛋白相对表达水平降低(P<0.05);心肌纤维化病变明显，线粒体排列紊乱、体积变小皱缩、膜密度增大，线粒体嵴减少。与模型组比较，心阳片各剂量组和培哚普利组小鼠LVEF、LVFS升高，LVESD及LVEDD降低，心肌组织纤维化面积比率减少，ANP、BNP、Col3α、MYH7 mRNA相对表达水平降低，ROS平均荧光强度降低，SOD活性升高，p-HDAC2平均荧光强度降低，p-HDAC2、NOX1蛋白相对表达水平降低，Nrf2、xCT蛋白相对表达水平升高(均P<0.05);心肌纤维化减少，线粒体排列较规整，线粒体增大、膜密度减低，线粒体嵴增加。与模型组比较，心阳片中、高剂量组及培哚普利组小鼠心肌组织GPX4蛋白相对表达水平升高(均P<0.05)。结论 心阳片可能通过调控HDAC2介导Nrf2抗氧化通路改善慢性心力衰竭小鼠铁死亡，从而改善心室重构。

关键词

心阳片 / 慢性心力衰竭 / 铁死亡 / 组蛋白去乙酰化酶2 / 核转录因子红系2相关因子2抗氧化通路 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金面上项目(No.82174316); 广州市科技局基础与应用基础研究项目(No.2024A04J4491);广州市科技局市校(院)企联合资助项目(No.2023A03J0288); 深圳市“医疗卫生三名工程”项目(No.SZZYSM202201007)