耳穴疗法对失眠模型大鼠睡眠的改善作用及对γ-氨基丁酸能系统通路的影响

摘要

目的 通过研究耳穴疗法对失眠模型大鼠睡眠的改善情况及对γ-氨基丁酸(GABA)能系统通路的影响，探讨其中枢作用机制。方法 将60只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、耳穴贴压组、耳穴刺络组和耳穴刺络结合贴压组，每组12只。除空白对照组外，其余大鼠采用腹腔注射对氯苯丙氨酸的方法复制失眠模型。造模完成后，分别以耳甲区贴压(耳穴贴压组)、耳尖及耳背刺络(耳穴刺络组)、联合刺激(耳穴刺络结合贴压组)连续干预5 d,每日一次。干预结束后，观察大鼠一般情况及体质量变化；翻正反射实验检测大鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间；HE染色法观察大鼠下丘脑神经元形态；酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清GABA、谷氨酸含量；免疫组织化学法(IHC)、实时荧光定量PCR法分别检测大鼠下丘脑γ-氨基丁酸A型受体α1(GABA ARα1)和γ-氨基丁酸A型受体γ2(GABA ARγ2)蛋白表达、mRNA表达；蛋白质印迹法(WB)检测大鼠下丘脑GABA ARα1、GABA ARγ2、谷氨酸脱羧酶65/67(GAD65/67)、γ-氨基丁酸1型转运体(GAT-1)和γ-氨基丁酸转氨酶(GABA-T)蛋白表达。结果 与空白对照组比较，模型组大鼠体质量降低，睡眠持续时间缩短(P<0.05),下丘脑神经元形态结构损伤严重，细胞排列紊乱、间隙变大，胞体增大，空泡样性状明显；与模型组比较，各干预组大鼠体质量增加，睡眠持续时间延长(P<0.05),其中耳穴贴压组睡眠持续时间延长更明显(P<0.05),各干预组下丘脑神经元细胞结构损伤均有恢复，耳穴贴压组改善情况尤为明显。与空白对照组比较，模型组大鼠血清GABA含量下降，血清谷氨酸含量升高，下丘脑GABA ARα1、GABA ARγ2、GAD65/67蛋白表达降低，GAT-1、GABA-T蛋白表达升高，GABA ARα1、GABA ARγ2的mRNA表达降低(P<0.05);与模型组比较，耳穴贴压组、耳穴刺络组血清GABA含量升高，耳穴贴压组、耳穴刺络结合贴压组血清谷氨酸含量降低，各干预组下丘脑中GABA ARα1的mRNA表达升高，耳穴贴压组、耳穴刺络结合贴压组下丘脑中GABA ARγ2的mRNA表达升高，耳穴贴压组下丘脑中GABA ARα1(IHC,WB)、GABA ARγ2(WB)、GAD65/67蛋白表达升高，GAT-1、GABA-T蛋白表达降低，耳穴刺络组下丘脑中GABA ARα1、GABA ARγ2蛋白表达(IHC,WB)升高，GABA-T蛋白表达降低，耳穴刺络结合贴压组下丘脑中GABA ARγ1(IHC)、GABA ARγ2(WB)蛋白表达升高，GAT-1、GABA-T蛋白表达降低(P<0.05);各干预组间比较，耳穴贴压组血清GABA含量升高，血清谷氨酸含量降低，下丘脑GABA ARα1、GABA ARγ2的mRNA表达升高，GABA ARα1(IHC)、GAD65/67蛋白表达升高，GABA-T蛋白表达降低(P<0.05),耳穴刺络组下丘脑GABA ARγ2蛋白表达(IHC)升高(P<0.05)。结论 耳穴疗法尤其是耳穴贴压可改善失眠，其作用机制可能是通过上调下丘脑GABA ARα1、GABA ARγ2、GAD65/67蛋白表达，下调GAT-1、GABA-T蛋白表达，影响了GABA能系统通路实现的。

关键词

失眠 / 耳穴疗法 / 耳穴贴压 / 耳穴刺络 / γ-氨基丁酸 / 神经递质 / 大鼠

基金资助

国家重点研发计划项目(No.2022YFC3500601); 河北中医药大学研究生创新资助立项项目(No.XCXZZBS2024003)