理气活血滴丸通过调控HIF-1α/BNIP3信号通路抑制细胞凋亡改善大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制

摘要

目的 探讨理气活血滴丸抑制心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠心肌细胞凋亡的机制。方法 96只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、理气活血滴丸组、重组腺病毒阴性对照(Ad-shNC)组、重组腺病毒干涉缺氧诱导因子-1α(Ad-shHIF-1α)组、理气活血滴丸+Ad-shNC组、理气活血滴丸+Ad-shHIF-1α组，每组12只。通过灌胃理气活血滴丸[175.0 mg/(kg·d)]预处理相应组别大鼠，连续10 d。其中，第7天给予相应组别大鼠左心室壁多点注射重组腺病毒；第10天，施冠状动脉结扎术建立MIRI模型，假手术组仅穿线不结扎。复灌结束后取材。酶联免疫吸附测定法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)含量；2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法测量心肌梗死体积比；HE染色法观察心肌组织形态；原位末端转移酶标记法检测心肌细胞凋亡率；蛋白质印迹法检测凋亡相关因子[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、剪切型胱天蛋白酶3]及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/Bcl-2-腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路关键蛋白[HIF-1α、血红素加氧酶-1(HO-1)、BNIP3]的表达。结果 理气活血滴丸预处理可降低MIRI大鼠血清CK-MB、cTnI、H-FABP水平和心肌梗死体积比，改善心肌组织形态，减少心肌细胞凋亡，上调Bcl-2蛋白表达，下调Bax、剪切型胱天蛋白酶3及HIF-1α、HO-1、BNIP3蛋白表达(P<0.05)。腺病毒介导的小发卡RNA干涉HIF-1α表达可削弱理气活血滴丸预处理减轻MIRI大鼠心肌损伤及抑制细胞凋亡的作用(P<0.05)。结论 理气活血滴丸可通过调控HIF-1α/BNIP3信号通路抑制心肌细胞凋亡而保护MIRI大鼠心肌。

关键词

理气活血滴丸 / 心肌缺血再灌注损伤 / 细胞凋亡 / 缺氧诱导因子-1α/B淋巴细胞瘤-2-腺病毒E1B 19 kDa相互作用蛋白3信号通路 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82360965,No.81860873)