补中益气汤调控自身免疫性甲状腺炎小鼠巨噬细胞极化的机制研究

王兰亭; 翟钊晗; 鞠首信; 孔亮; 丁杰; 肖瑶; 陈怡然; 王智民

北京中医药大学学报 ›› 2025, Vol. 48 ›› Issue (4) : 529 -541.

王兰亭, 翟钊晗, 鞠首信, 孔亮, 丁杰, 肖瑶, 陈怡然, 王智民

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摘要

目的探讨补中益气汤调控巨噬细胞极化干预自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠的机制。方法采用随机数字表法将48只SPF级NOD.H-2^h4小鼠分为正常组，模型组，补中益气汤低、中、高（4.10、8.19、16.38 g/kg）剂量组，硒酵母片组（0.026 mg/kg）,每组8只。除正常组外，其余各组小鼠自由饮用0.05%碘化钠溶液8周以建立AIT模型。模型建立后，各给药组小鼠灌胃相应药物，正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，每日1次，连续8周。采用高效液相色谱-示差折光法分析补中益气汤中的黄芪甲苷含量；苏木素-伊红染色法观察小鼠甲状腺组织病理形态变化；酶联免疫吸附测定法检测血清甲状腺过氧化物酶抗体（TPO-Ab）、甲状腺球蛋白抗体（TgAb）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；免疫荧光法测定小鼠甲状腺组织中M1和M2巨噬细胞阳性面积百分比；流式细胞术检测小鼠脾脏组织中巨噬细胞极化情况；实时荧光定量PCR法检测小鼠脾脏组织核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3（NLRP3）、核因子κB抑制蛋白α（IκBα）、核转录因子-κB（NF-κB）p65 mRNA表达；蛋白质印迹法检测小鼠脾脏组织磷酸化IκBα（p-IκBα）、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、NLRP3蛋白表达。结果补中益气汤中黄芪甲苷的含量为（7.09±0.06） g/L。与正常组比较，模型组小鼠甲状腺组织可见明显的淋巴细胞浸润且血清中TPO-Ab、TgAb、IL-6及TNF-α含量升高（P<0.05）;甲状腺组织M1型巨噬细胞阳性面积百分比增加（P<0.05）;脾脏组织M1型巨噬细胞比例升高，M1/M2升高，NF-κB p65、NLRP3 mRNA相对表达水平升高，p-IκBα、p-NF-κB p65、NLRP3蛋白相对表达水平升高（P<0.05）。与模型组比较，给药组小鼠甲状腺炎症浸润程度减轻且血清中TPO-Ab、TgAb、IL-6及TNF-α含量降低，脾脏组织M1/M2降低，NF-κB p65 mRNA相对表达水平降低，p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白相对表达水平降低（P<0.05）;补中益气汤高剂量组与硒酵母片组IL-10含量升高，甲状腺组织M2型巨噬细胞阳性面积百分比增加，脾脏组织M2型巨噬细胞比例增加，NLRP3 mRNA及蛋白相对表达水平降低（P<0.05）。结论补中益气汤可能通过抑制NF-κB/NLRP3信号通路调控巨噬细胞极化，进而改善AIT小鼠的炎症损伤。