四逆散调节HPA轴和炎症水平改善肝癌抑郁样行为和抗肿瘤的机制研究

摘要

目的 研究四逆散对肝癌抑郁小鼠血清下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴相关激素及炎症因子水平的影响并评估其对抑郁行为及肿瘤增殖的作用。方法 将48只SPF级C57BL/6雌性小鼠按照完全随机设计分为空白组(8只)和造模组(40只)。造模组行慢性温和不可预知应激刺激(CUMS)共6周，在CUMS第4周结束时，空白组和造模组均行肝原位移植瘤手术。在CUMS第6周结束时，彩色多普勒超声观察小鼠肝原位移植瘤成瘤情况，悬尾实验评估小鼠抑郁行为。剔除不成瘤及死亡小鼠，剩余造模组小鼠根据悬尾不动时间采用随机区组设计分为模型组(等体积蒸馏水)、氟西汀组(5.0 mg/kg)及四逆散低、中、高剂量(5.2、10.4、20.8 g/kg)组，每组6只，每日给药1次，连续干预21 d。给药后，通过旷场实验、悬尾实验及强迫游泳实验评估小鼠抑郁行为；测量肝原位移植瘤大小，苏木素-伊红染色观察肿瘤组织病理学变化，免疫组织化学法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(Ki-67)阳性细胞率，评估肝原位移植瘤增殖情况；酶联免疫吸附测定法检测血清HPA轴相关激素促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)及炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)水平；蛋白质印迹法检测肿瘤组织丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)磷酸化水平及核因子-κB(NF-κB)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱天冬酶-1(Caspase-1)的表达水平。结果 与空白组比较，模型组旷场总运动距离减少、悬尾不动时间和强迫游泳不动时间增加(P<0.05,P<0.01);模型组原位移植瘤体积增大(P<0.01),血清CRH、ACTH、CORT、TNF-α、IL-1β及IL-6水平升高(P<0.01),肿瘤组织MAPKs磷酸化水平及NF-κB、NLRP3、Caspase-1表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较，四逆散中、高剂量组强迫游泳不动时间减少，旷场总运动距离增加(P<0.01);四逆散高剂量组悬尾不动时间减少(P<0.05);四逆散低、中、高剂量组原位移植瘤体积较小，肿瘤组织空泡化及坏死增加，Ki-67阳性细胞率下降(P<0.01),血清CRH、ACTH、CORT、TNF-α、IL-1β及IL-6水平下降(P<0.05),肿瘤组织MAPKs磷酸化水平及NF-κB、NLRP3、Caspase-1表达水平降低(P<0.01)。结论 四逆散可能通过调控肝癌抑郁小鼠原位移植瘤MAPKs活化并抑制NF-κB、NLRP3及Caspase-1表达，降低血清炎症因子及HPA轴相关激素水平，改善肝癌抑郁小鼠抑郁行为，并抑制原位移植瘤增殖。

关键词

四逆散 / 肝癌 / 抑郁 / 下丘脑-垂体-肾上腺轴 / 炎症因子 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金面上项目(No.82274526); 湖南省临床医疗技术创新引导项目(No.2021SK51410); 湖南省中医肿瘤临床医学研究中心项目(No.2021SK4023); 湖南中医药大学研究生创新课题(No.2024CX210);湖南中医药大学本科生科研创新基金项目(No.2023BKS143)