探讨益气温阳方抑制变应性鼻炎小鼠鼻黏膜细胞自噬及保护ZO-1及occludin的作用

摘要

目的 观察益气温阳方(黄芪、党参、干姜、桂枝、麻黄、辛夷、五味子、地龙、甘草)对变应性鼻炎小鼠模型的治疗效果和对鼻黏膜细胞抑制自噬、保护紧密连接关键蛋白——闭锁连接蛋白1(ZO-1)及闭合蛋白(occludin)的影响。方法 将30只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为6组：空白组，模型组，益气温阳方低、中、高剂量组(7、14、28 g/kg)及西替利嗪组(1.667 mg/kg),每组5只。卵清蛋白腹腔注射加鼻部激发致敏造模，鼻部激发致敏前1 h灌胃给药，共7 d。对小鼠行为进行评分。采集小鼠鼻黏膜组织，HE染色观察鼻黏膜炎症反应，过碘酸希夫染色观察鼻黏膜杯状细胞增生情况，酶联免疫吸附测定法检测鼻腔灌洗液IgE含量，免疫组化法检测空白组、模型组、益气温阳方高剂量组鼻黏膜中ZO-1及occludin蛋白表达，蛋白质印迹法检测鼻黏膜中自噬微管相关蛋白轻链β3(LC3B)、P62及Beclin1蛋白表达。结果 与空白组比较，模型组小鼠行为学总分升高(P<0.01),挠鼻、喷嚏、流涕各项评分增加。鼻黏膜上皮中断、被破坏，大量炎性细胞浸润，杯状细胞增生，黏液分泌增多，黏膜肿胀明显，鼻腔灌洗液中IgE含量增加(P<0.01)。鼻黏膜中ZO-1、occludin蛋白表达减少(P<0.05)。LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1蛋白表达增加(P<0.05),P62蛋白表达减少(P<0.05)。给药干预后，与模型组比较，益气温阳方高剂量组和西替利嗪组小鼠行为学总分降低(P<0.01),鼻黏膜肿胀减轻，炎性细胞浸润和杯状细胞数量减少，鼻腔灌洗液中IgE含量减少(P<0.01),鼻黏膜中ZO-1、occludin蛋白表达增加(P<0.05)。益气温阳方高剂量组小鼠LC3BⅡ/Ⅰ、Beclin1蛋白表达减少(P<0.05),P62蛋白表达增加(P<0.05)。结论 益气温阳方对变应性鼻炎小鼠具有良好的治疗效果，该作用机制可能与其抑制鼻黏膜细胞自噬从而促进鼻黏膜修复相关。

关键词

益气温阳方 / 变应性鼻炎 / 自噬 / 紧密连接 / 闭锁连接蛋白1 / 闭合蛋白 / 小鼠

基金资助

国家自然科学基金项目(No.82104939); 苏州市卫生青年骨干人才“全国导师制”培训项目(No.Qngg2022035)