扶正透邪解毒方调控Th17/Treg平衡改善铜绿假单胞菌肺炎大鼠肺损伤的机制研究

摘要

目的 探讨扶正透邪解毒方对铜绿假单胞菌肺炎（PAP）大鼠肺损伤的影响并探究其可能的作用机制。方法 经口气管插管后滴入3×10～9CFU/mL铜绿假单胞菌悬液0.1 mL以复制PAP大鼠模型。将36只SD大鼠按照随机数字表法分为正常组，模型组，扶正透邪解毒方低（3.18 g/kg）、中（6.36 g/kg）、高（12.72 g/kg）剂量组，哌拉西林组（0.27 g/kg）,每组6只。各给药组大鼠给予相应药物，正常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水，1次/d,连续7 d。采用实时荧光PCR法检测各组大鼠肺组织铜绿假单胞菌核酸值；苏木素-伊红染色法观察各组大鼠肺组织病理形态变化；流式细胞术检测各组大鼠外周血中辅助性T细胞（Th17）和调节性T细胞（Treg）的分化情况；酶联免疫吸附测定检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β（TGF-β）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）含量；实时荧光PCR法检测各组大鼠肺组织核孤儿受体γt（RORγt）、叉头蛋白3（FoxP3）及相关炎症因子的mRNA表达；蛋白质印迹法检测各组大鼠肺组织RORγt、FoxP3及相关炎症因子的蛋白表达。结果 造模大鼠血清铜绿假单胞菌均为阳性且病理组织切片有明显炎症病变，表明造模成功。模型组大鼠肺组织可见大量炎性细胞浸润、肺组织结构破坏、上皮细胞脱落。与正常组比较，模型组大鼠外周血Th17占CD4⁺T细胞比例升高，Treg占比下降，Th17/Treg升高（P<0.01）;血清中TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17含量升高，IL-10含量下降（P<0.01）;模型组大鼠RORγt、TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17 mRNA表达升高，FoxP3、IL-10 mRNA表达下降（P<0.01）;RORγt、TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17蛋白表达水平升高，FoxP3、IL-10蛋白表达水平下降（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较，扶正透邪解毒方低、中、高各剂量组及哌拉西林组大鼠肺组织结构破坏、上皮细胞脱落、炎性细胞浸润等情况均有所改善；扶正透邪解毒方中、高剂量组及哌拉西林组大鼠Th17占CD4⁺T细胞比例降低，Treg占比升高，Th17/Treg下降（P<0.05,P<0.01）;各给药组大鼠血清中TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17含量下降，抗炎因子IL-10含量升高（P<0.05,P<0.01）;扶正透邪解毒方中、高剂量组及哌拉西林组大鼠RORγt、TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17 mRNA表达下降，FoxP3、IL-10 mRNA表达升高（P<0.05,P<0.01）;RORγt、TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-17蛋白表达水平下降，FoxP3、IL-10蛋白表达水平升高（P<0.01）。结论 扶正透邪解毒方可改善PAP大鼠肺部炎性损伤，降低体内炎症因子水平，提高抑炎因子水平，其机制可能是通过调节Th17/Treg免疫平衡。

关键词

扶正透邪解毒方 / 铜绿假单胞菌 / 细菌性肺炎 / 辅助性T细胞/调节性T细胞 / 炎性肺损伤 / 大鼠

基金资助

国家自然科学基金青年科学基金项目(No.81703900); 北京中医药大学东直门医院2020年度科技创新专项(No.DZMKJCX-2020-027)